新しい遺伝子多型検出システムによる免疫・アレルギー性疾患の病因遺伝子の解析

利用新型遗传多态性检测系统分析免疫/过敏性疾病的致病基因

• 批准号: 12204085
• 负责人: 堀内 孝彦
• 金额: --
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12204085/
• 关键词: 遺伝子解析; SNP; 全身性エリテマトーデス; 慢性関節リウマチ

<背景と目的>本研究の目的は、我々が開発した遺伝子多型検出システム(DNAプール)PLACE-SSCP法を応用することにより、膠原病・アレルギー疾患の疾患関連遺伝子を効率よく大規模に探索し、さらに機能解析へと発展させることにある。従来、多数の候補遺伝子について単一塩基多型(SNP)を同定と関連解析には莫大な労力が必要であった。我々の新技術は1%前後の誤差でアレル頻度を決定できかつ同時に数百検体を検討できることから、迅速、正確かつ大規模なSNP同定、関連解析が可能となった。<検討結果>本年度は対象疾患を全身性エリテマトーデス(SLE)、慢性関節リウマチ(RA)として、それぞれ150名あまりの患者DNA、RNAを採取した。候補遺伝子としてアポトーシス関連分子、TNF/TNF受容体ファミリー分子、B細胞シグナル伝達分子、補体、癌遺伝子をターゲットに解析を進めた。陽性の結果が得られた、TNF/TNF受容体ファミリーのAPRILとtypeII TNF受容体(TNF-RII)、アポトーシス関連分子のcaspase-8について結果を提示する。1)APRIL:まずAPRILのゲノムの構造を決定し、6個のexonからなることを初めて明らかにした。さらにSSCP法にて、G67B,N96Sの多型を認めた。RA患者において健常人より有意に67Gの頻度が高く、APRILとRAの関連が推測された。2)TNF-RII:196Rの頻度がSLE患者では有意に高い結果をえた。さらに機能解析をおこないwild-typeの196Mに比べて、196RではTNF刺激によるcytotoxicityならびにIL-6産生が亢進することを明らかにした。3)caspase-8:SNPを同定する過程でdeath domainを欠失したcaspase-8のalternative splicing product(caspase-8L)を見いだした。この新規の分子はcaspase-8によるapoptosisを抑制する。さらにSLE患者PBLでは有意にcaspase-8Lが減少していた。<考察>関連解析により複数の疾患候補遺伝子を見いだした。それぞれの機能解析をおこなっており、病因への関与をさらに明らかにできると考える。

Background Objective: The purpose of this study is to explore the application of PLACE SSCP method in the detection of disease-related genes in collagen diseases, and to explore the development of function analysis in large scale. For example, most candidate genes are identified by SNP and association analysis is necessary. Our new technology can determine the frequency of SNP identification by error of 1% or so, and can detect hundreds of samples simultaneously, quickly and accurately, and can determine the identity of SNP on a large scale. <Results> DNA and RNA samples were collected from 150 patients with systemic diseases (SLE) and chronic joint diseases (RA) this year. Candidate DNA analysis of related molecules, TNF/TNF receptor molecules, B-cell receptor molecules, complement, cancer molecules Positive results were obtained from APRIL, TNF receptor type II (TNF-RII), and caspase-8, a related molecule of TNF/TNF receptor. 1)APRIL: The structure of APRIL is determined by six exons. SSCP method, G67B, N96S and polytype recognition. The frequency of 67G in RA patients is high, and the relationship between APRIL and RA is speculated. 2)TNF-RII: 196R frequency is higher in SLE patients than in controls. 196M/196R/196M/196R/196R/196M/196R/1966/196R/196R/16/196R 3)caspase-8:SNP identification process, death domain, alternative splicing product(caspase-8L) These new molecules inhibit apoptosis in caspase-8. In SLE patients, PBL is intentionally reduced in caspase-8L. <Investigation> Correlation analysis for multiple disease candidates The analysis of the function of the disease, the etiology and the relationship between the disease and the disease

项目成果

Harashima S et al.: "Outside-to-inside signal through the membrane TNF-α induces E-selectin (CD62E) expression on activated human CD4^+ T cells"J.Immunology. 166. 130-136 (2001)

Harashima S 等人：“通过膜 TNF-α 的从外到内信号诱导激活的人 CD4^+ T 细胞上的 E-选择素 (CD62E) 表达”J.Immunology。166. 130-136 (2001)

Kojima T. et al.: "Analysis of Fas ligand gene mutation in patients with systemic lupus erythemotosus"Arthritis Rheumatism. 43. 135-139 (2000)

Kojima T.等人：《系统性红斑狼疮患者Fas配体基因突变分析》关节炎风湿病。

Horiuchi T et al.: "MBL gene mutation is not a risk factor for SLE and RA in Japanese"Genes & Immunity. 1. 464-466 (2000)

Horiuchi T 等人：“MBL 基因突变不是日本人 SLE 和 RA 的危险因素”Genes

Horiuchi T et al.: "Dominant expression of a novel splice variant of caspase-8 in human peripheral blood lymphocytes."B.B.R.C.. 272. 877-881 (2000)

Horiuchi T 等人：“人外周血淋巴细胞中 caspase-8 的新型剪接变体的显性表达。”B.B.R.C.. 272. 877-881 (2000)

Inazuka M et al.: "Analysis of p53 tumsur suppressor gene somatic mutations in RA synovium"Rheumatology. 39. 262-266 (2000)

Inazuka M 等人：“RA 滑膜中 p53 肿瘤抑制基因体细胞突变的分析”风湿病学。