(DNAプール)PLACE‐SSCP法による自己免疫疾患の病因遺伝子の網羅的探索

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本研究の目的は、我々が開発した新しい解析システム(DNAプール)PLACE-SSCP法を用いて、自己免疫疾患の病因遺伝子を明らかにすることにより、病態解明を行い、最終的にはその知見を疾患特異的な治療法開発、難治病態の効果的な制御へと応用することにある。(DNAプール)PLACE-SSCP法は、数百人規模の検体について、一気に、迅速かつ正確なアレル頻度の解析が可能であり、多数の疾患候補遺伝子について、網羅的な疾患関連解析を行う本研究の目的に適している。合計61個の遺伝子についてその全エクソン領域ならびにプロモーター領域について、プライマーの設定を行った。SLE患者11名、健常人1名についてPLACE-SSCP法、塩基配列決定を行ってSNP同定を進めた。なお61遺伝子のうち8遺伝子は、SSCPパターンなどから、SNPの同定、解析が困難であった。残りの53遺伝子について1056STSを作成し、その解析をすべて終了した。これらの遺伝子の全エクソン、プロモーター領域の中に合計314のポリモルフィズムを同定した。ほとんどが、SNPであったが、うち15はins/delであった。エクソンの解析に際しては、隣接するイントロン部にプライマーを設定しているため、一部イントロンも解析している。53遺伝子に同定したSNP(ごく一部ins/delを含む)は、プロモーター領域に103個、5'UTRに19個、翻訳領域に72個、3'UTRに54個、イントロンに66個で合計314個であった。このうちの約半数が、dbSNPに登録のない新規のSNPであった。SLE患者264名(女性95%)、対照269名(女性100%)について、それぞれDNAをプールしてPLACE-SSCP法で解析し、314SNPすべてのアレル頻度を決定して、疾患との関連を検討した。いくつかのSNPについて有意な疾患との関連を見い出した。