インスリン依存性糖尿病患者リンパ球細胞障害測定系により自己免疫学的機序の解明

使用淋巴细胞细胞毒性测量系统阐明胰岛素依赖型糖尿病患者的自身免疫机制

• 批准号: 06770580
• 负责人: 稲田 浩
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770580/
• 关键词: Type 1 糖尿病; Tリンパ球; ラ氏島抗原; MHC class1

1.ヒトMHCクラスI分子発現β細胞の作成IDDM患者の末梢血より単核球分画を分離し、ポリエチレングリコールを用いて、ラットインスリノーマ細胞とハイブリーマ細胞を作成する。ハイブリドーマ細胞の選択は、抗ヒトMHC抗体と抗インスリン抗体をもちいてdouble positiveの細胞を選択した。明らかに患者リンパ球とインスリノーマ細胞のハイブリドーマは作成できたが2カ月の継代培養をヒトMHCとインスリンのdouble positiveの細胞は脱落した。継代培養で安定したハイブリドーマが得られるにはさらに繰り返して試みる必要が有る。2.CD8陽性Tリンパ球による細胞傷害性試験上記の細胞を^<51>Crでラベルし標的細胞とし、同じ患者末梢血よりイムノカラム法を用い分離したCD8陽性Tリンパ球をeffector cellとする細胞傷害性試験を行なう予定である。約15mlの末梢血を採取し、比重分離法で単核球は約1.5X10^7個を得るこれを抗CD8抗体でコーティングされたカラムをもちいて得られたCD8陽性細胞は1X10^6以下に減少した。細胞障害性試験を行なうためには、1ウェル最低1X10^6のCD8陽性細胞が必要であり、標的細胞/細胞障害性細胞の比率を変化させるためには、1X10^7以上のCD8陽性細胞が必要である。患者よりの採血量を増加する方法も有るが、得られたCD8陽性細胞をその抗原特異性を変化させずに増加させることが知られている抗CD3抗体を用いることとした。そして現在、抗CD3抗体を産生するハイビリド-マOKT3を購入しその培養上清をもちいてリンパ球の増殖を試みている。分離できたCD8陽性Tリンパ球をこの方法により増殖できれば次の段階として目的とする細胞傷害性試験が可能となる。以上、研究は途中であるが今度研究を継続して行く予定である。

1. To create and isolate peripheral blood of IDDM patients using MHC I molecular expression β cells,ポリエチレングリコールを is made of いて, ラットインスリノーマcells and とハイブリーマcells. The selection of ハイブリドーマcellsの択は, anti-ヒトMHC antibody and anti-インスリン antibody をもちいてdouble positiveのcells をぞした. Made by Akira patient リンパとインスリノーマcell のハイブリドーマはできたが2カ月の継代 foster をヒトMHC とインスリンのdouble The positive cells are falling off.継generation culture is stable and stable, and it is necessary and necessary. 2. CD8-positive T cells are the cells labeled in the CD8-positive T cells damage testとし、The patient's peripheral blood よりイムノカラム method is used to separate the したCD8 positive Tリンパball effector CellとするCell-damaging testを行なうpredeterminedである. Approximately 15ml of peripheral blood was collected, and the specific gravity separation method was used to obtain single nuclei. Approximately 1.5X10^7 pieces were used to obtain anti-CD8 antibodies. The number of CD8-positive cells in the body was reduced below 1X10^6. Cytotoxicity test is necessary for the detection of CD8-positive cells at least 1X10^6, and the target cells are It is necessary to change the ratio of cells/cell-damaging cells and to obtain CD8-positive cells of more than 1X10^7. The patient's blood collection volume was increased and the method was used to obtain CD8-positive cells and antigen-specific The sex has changed and the anti-CD3 antibody has been used. Now, the anti-CD3 antibody-producing するハイビリド-マOKT3を was purchased from the しその culture supernatant をもちいてリンパball のproliferation をtest みている. Method of isolating CD8-positive T cells and increasing the number of cells. Purpose: Cell damage test. It is possible. Above, the research is on the way and the current research is still in progress.