DNA結合能を有する微小管モーター蛋白質(Kid)の細胞分裂及び増殖における機能

具有DNA结合能力的微管运动蛋白（Kid）在细胞分裂和增殖中的功能

• 批准号: 07458188
• 负责人: 山本 雅
• 金额: $ 4.74万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 1997
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07458188/
• 关键词: 細胞分裂; 紡錘体形成; 染色体分配; 細胞周期依存的リン酸化; セントロメア; モーター蛋白質; キネシン; Kid; α-サテライトDNA; ユビキチネーション; 核膜崩壊; アルフォイドDNA; EBウイルス

KidはDNA結合能を持つキネシン様モーター蛋白質で細胞分裂期(細胞周期M期)で重要な役割を果たしていることが示唆されている。今年度は、昨年度までに見出したKid会合蛋白質の解析と、Kidのリン酸化による機能制御に関する解析を主として行った。1. yeast two-hybrid法により、Kid会合蛋白質の候補として見出したFAFl,UBC9各蛋白質の全長cDNAを得た。このうちFAF1とUBC9cDNAについてはFLAGTagをつけて発現ベクターpMEI8Sに組み込んだ。これをKidと共に293T細胞に共発現させ、その細胞抽出液を用いた免疫共沈実験を行った。その結果、293T細胞内でもKidはFAF1やUBC9と会合しうることが分かった。2. HeLa細胞をS期で同調させ、細胞周期依存的Kid蛋白質のリン酸化を調べた。その結果、M期でKid蛋白質がよりリン酸化されていることが示唆された。Kid蛋白質はcdc2キナーゼによりリン酸化されうる配列TPKRERを有しており、事実カエル卵から精製したcyclinB/cdc2キナーゼによってin vitroでリン酸化された。又、M期の進行に重要であることが報告されているPLKキナーゼについても、そのcDNAにmyc Tagをつけた発現プラズミドを導入した細胞の抽出液を用い、その中の抗myc抗体による沈降物がGST Kidをin vitroでリン酸化することを示した。次いでcdc2キナーゼによりリン酸化を受けると予測された配列(TPKRER)の、リン酸化型を特異的に認識する抗体を作成した。3. 米国UCSFのグループとの共同研究により、カエル卵抽出液中に抗Kid抗体と反応する約61kDa蛋白質の存在が確認された。おそらくこれは、カエルKid蛋白質と考えられ、cDNAクローニングを試みている。

Kid is able to bind DNA to proteins during cell division (M phase of the cell cycle), and is responsible for the development of DNA binding. This year, we have seen the analysis of Kid protein and the functional control of Kid protein. 1. The full-length cDNA of each protein of FAF1 and UBC9 was obtained by the yeast two-hybrid method. FAF1 and UBC9cDNA are not included in FLAGTag. This is the first time that we've seen this. 293T cells contain FAF1 and UBC9. 2. HeLa cells are regulated by cell cycle dependent Kid protein. As a result, the M phase of the Kid protein was transformed into a protein. Kid protein cdc2 In addition, it is important to report the progress of PLK in vitro, myc Tag in vitro and anti-myc antibody in vitro. In the second place, cdc2 was detected by TPKRER and TPKRER was detected by antibody. 3. The presence of anti-Kid antibody and anti-KDa protein in UCSF extract was confirmed by joint research.おそらくこれは、カエルKid蛋白质と考えられ、cDNAクローニングを试みている。

项目成果

Yamanoto,T.: "Superfamilies of Protooncogenes:Homology Cloning and Characterization of Related Members." Methods in Enzymology(eds.Vogt and Verma)Academic Press., 15 (1995)

Yamanoto,T.：“原癌基因超家族：相关成员的同源克隆和表征。”

Dusko Ilic: "Focal adhesion kinase at the crossroads of signal transduction." J.Cell.Sci.(in press).

Dusko Ilic：“信号转导十字路口的粘着斑激酶。”

Yamamoto,T.: "Molecular biology of cancer:Oncogenes and tumorsuppressor genes." Molecular Biology in Clinical Oncology and Hematology, 15 (1995)

Yamamoto,T.：“癌症的分子生物学：癌基因和肿瘤抑制基因。”

Yasunaga,M.: "Involvement of Fyn Tyrosine Kinase in Progression of Cytokinesis of B Lymphocyle Progenitor." J.Cell Biol.(in press). (1996)

Yasunaga,M.：“Fyn 酪氨酸激酶参与 B 淋巴细胞祖细胞细胞分裂过程”。

Dusko Ilic: "Imairment of mobiliy in endodermal cells by FAK deficiency." Exp.Cell Res.222. 298-303 (1996)

Dusko Ilic：“FAK 缺陷导致内胚层细胞活动能力受损。”