DNA結合能を有する微小管モーター蛋白質(Kid)の細胞分裂及び増殖における機能

具有DNA结合能力的微管运动蛋白(Kid)在细胞分裂和增殖中的功能

基本信息

  • 批准号:
    07458188
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 4.74万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research (B)
  • 财政年份:
    1995
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1995 至 1997
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

KidはDNA結合能を持つキネシン様モーター蛋白質で細胞分裂期(細胞周期M期)で重要な役割を果たしていることが示唆されている。今年度は、昨年度までに見出したKid会合蛋白質の解析と、Kidのリン酸化による機能制御に関する解析を主として行った。1. yeast two-hybrid法により、Kid会合蛋白質の候補として見出したFAFl,UBC9各蛋白質の全長cDNAを得た。このうちFAF1とUBC9cDNAについてはFLAGTagをつけて発現ベクターpMEI8Sに組み込んだ。これをKidと共に293T細胞に共発現させ、その細胞抽出液を用いた免疫共沈実験を行った。その結果、293T細胞内でもKidはFAF1やUBC9と会合しうることが分かった。2. HeLa細胞をS期で同調させ、細胞周期依存的Kid蛋白質のリン酸化を調べた。その結果、M期でKid蛋白質がよりリン酸化されていることが示唆された。Kid蛋白質はcdc2キナーゼによりリン酸化されうる配列TPKRERを有しており、事実カエル卵から精製したcyclinB/cdc2キナーゼによってin vitroでリン酸化された。又、M期の進行に重要であることが報告されているPLKキナーゼについても、そのcDNAにmyc Tagをつけた発現プラズミドを導入した細胞の抽出液を用い、その中の抗myc抗体による沈降物がGST Kidをin vitroでリン酸化することを示した。次いでcdc2キナーゼによりリン酸化を受けると予測された配列(TPKRER)の、リン酸化型を特異的に認識する抗体を作成した。3. 米国UCSFのグループとの共同研究により、カエル卵抽出液中に抗Kid抗体と反応する約61kDa蛋白質の存在が確認された。おそらくこれは、カエルKid蛋白質と考えられ、cDNAクローニングを試みている。
Kid は DNA binding energy を hold つ キ ネ シ ン others モ ー タ ー protein で cell division period (cell cycle phase M) で important な "を cut fruit た し て い る こ と が in stopping さ れ て い る. Map out our annual ま は, yesterday で に し た meet Kid protein analytical と の, Kid の リ ン acidification に よ る function suppression に masato す る parsing を main と し て line っ た. 1. The yeast two-hybrid method によ, Kid syncopation protein <s:1> candidate と て て yielded <s:1> FAFl, and the full-length cDNA of each protein fragment of UBC9 を obtained た. こ の う ち FAF1 と UBC9cDNA に つ い て は FLAGTag を つ け て 発 now ベ ク タ ー pMEI8S に group み 込 ん だ. こ れ を Kid に と に 293 t cells were 発 now さ せ, そ の cell extract を with い た immune were shen be 験 を line っ た. The そ そ results showed that in 293T cells, で で Kid で FAF1やUBC9と met up with <s:1> うる とが とが and とが で った. 2. The をS phase of HeLa cells is で in harmony with させ, and the cell cycle-dependent Kid protein is <s:1> リ and <s:1> acidified を in べた. The そ そ result, the m-phase でKid protein がよ がよ リ <e:1> acidification されて る る とが とが indicates された. Kid protein は cdc2 キ ナ ー ゼ に よ り リ ン acidification さ れ う る match column TPKRER を have し て お り, things be カ エ ル eggs か ら refined し た cyclinB/cdc2 キ ナ ー ゼ に よ っ て in vitro で リ ン acidification さ れ た. Stage again, M の were important で に あ る こ と が report さ れ て い る PLK キ ナ ー ゼ に つ い て も, そ の cDNA に myc Tag を つ け た 発 now プ ラ ズ ミ ド を import し た cells の extract を い, そ の の myc antibody resistance in に よ る sink content が GST Kid を in vitroでリ とを acidification する とを とを shows た. Time い で cdc2 キ ナ ー ゼ に よ り リ ン acidification を by け る と be さ れ た match column (TPKRER) の, リ ン acidification model を specific に know す る antibody を made し た. 3 m the UCSF の グ ル ー プ と の joint research に よ り, カ エ ル eggs in the extract に Kid antibody と resistance against 応 す る about 61 kda protein の exist が confirm さ れ た. お そ ら く こ れ は, カ エ ル Kid protein と exam え ら れ, cDNA ク ロ ー ニ ン グ を try み て い る.

项目成果

期刊论文数量(10)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Yamanoto,T.: "Superfamilies of Protooncogenes:Homology Cloning and Characterization of Related Members." Methods in Enzymology(eds.Vogt and Verma)Academic Press., 15 (1995)
Yamanoto,T.:“原癌基因超家族:相关成员的同源克隆和表征。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Dusko Ilic: "Focal adhesion kinase at the crossroads of signal transduction." J.Cell.Sci.(in press).
Dusko Ilic:“信号转导十字路口的粘着斑激酶。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Yamamoto,T.: "Molecular biology of cancer:Oncogenes and tumorsuppressor genes." Molecular Biology in Clinical Oncology and Hematology, 15 (1995)
Yamamoto,T.:“癌症的分子生物学:癌基因和肿瘤抑制基因。”
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Yasunaga,M.: "Involvement of Fyn Tyrosine Kinase in Progression of Cytokinesis of B Lymphocyle Progenitor." J.Cell Biol.(in press). (1996)
Yasunaga,M.:“Fyn 酪氨酸激酶参与 B 淋巴细胞祖细胞细胞分裂过程”。
  • DOI:
  • 发表时间:
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
  • 通讯作者:
Dusko Ilic: "Imairment of mobiliy in endodermal cells by FAK deficiency." Exp.Cell Res.222. 298-303 (1996)
Dusko Ilic:“FAK 缺陷导致内胚层细胞活动能力受损。”
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    0
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  • 通讯作者:
    小寺 義男, 藤本 和美, 中川 譲, 斎藤 達也, 川島 祐介, 七里 眞義
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  • 作者:
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  • 通讯作者:
    藤本竜平・小坂將・小林陽介・三宅香成・熊沢佳範・斉藤知己

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