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ハムスターに特異的なシトクロームP450分子種の誘導機構の解析

仓鼠特异性细胞色素P450分子种类的诱导机制分析

基本信息

批准号：
07772208
负责人：
頭金正博
金额：
$ 0.64万
依托单位：
国立公衆衛生院
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

芳香族多環炭化水素化合物の3-メチルコランスレン(3-MC)によるハムスター肝におけるシトクロームP4502A8(CYP2A8)分子種の転写調節機構を解明することを目的として研究を行った結果、次に示す様な結果を得た。1. P450の誘導能を有する培養細胞系は限られており、特にCYP2A8を誘導する培養細胞系はこれまでに報告されていない、そこで、まず初めにハムスター初代培養肝細胞を用いて、種々の培養条件を検討した結果、無血清培養条件下で3-MCによるCYP2A8誘導能を有する培養細胞系を確立することができた。2. CYP2A8のゲノムDNA上の転写開始点を決定した。さらに、ゲノムDNAのクローニングを行い、転写開始点より約1000bpまでの上流域のゲノムDNAの構造解析を行った。その結果、従来から3-MCによって誘導されることが知られているCYP1A1の転写調節領域と相同性を示す領域(Dioxin response element)は存在しないことがわかった。このことは、CYP1A1とCYP2A8の転写調節機構が明らかに異なっていることを示していた。3. 転写調節領域の特定のためのレポータープラスミドを初代培養ハムスター肝細胞に導入する条件を、ルシフェラーゼ発現ベクターを用いて種々検討した。その結果、リン酸カルシウム法、DEAE-デキストラン法、リポフェクション法等に比べてエレクトロポレーション法が効率よくベクターを細胞に導入できることがわかった。

Aromatic Polycyclic Carbonized Hydrogen Compound 3-MC The regulatory mechanism of A8 (CYP2A8) molecular species has been explained and the purpose of the research has been studied and the results have been obtained. 1. The inducibility of P450 is limited to the cultured cell lines and the specific induction of CYP2A8.するCultured cell line はこれまでに report されていない、そこで、まず初めにハムスターThe initial culture of hepatocytes was carried out using various culture conditions and the results showed that the CYP2A8 inducibility of 3-MC under serum-free culture conditions was established and the cell line was established. 2. The starting point of the DNA of CYP2A8 is determined.さらに、ゲノムDNAのクローニングを行い、転WRITING STARTING POINT よりAbout 1000bpまでの Upper Basin のゲノムDNAのSTRUCTURE ANALYSISを行った. Dioxin response element) is the existence of the element.このことは、CYP1A1とCYP2A8の転WRits the adjustment mechanism が明らかに Different なっていることをshows していた. 3.転WRITING The specific field of regulation is the first generation cultured liver The conditions for cell introduction are as follows, and the conditions for introduction of cells are as follows:その results, リン acid カルシウム method, DEAE-デキストラン method, リポフェクション method, etc.べてエレクトロポレーション法がefficiencyよくベクターを CellsにImportできることがわかった.