サルモネラ属菌由来のクエン酸輸送タンパク質の精製と高次構造の解析

沙门氏菌柠檬酸转运蛋白的纯化和高阶结构分析。

• 批准号: 07770198
• 负责人: 島本 整
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770198/
• 关键词: サルモネラ; クエン酸; 能動輸送; 変異株; ネズミチフス菌; 膜タンパク質; 高次構造; 共輸送

能動輸送は、細胞内の恒常性維持や栄養物の取り込み、有害物の排出などにおいて重要な役割を果たしている。しかしながら、その機能を担っている輸送タンパク質の高次構造と機能の関係については、いまだ不明な点が多い。本研究においては、ネズミチフス菌(Salmonella typhinmurium)のCitAクエン酸輸送タンパク質の基質認識が変化した変異株を分離し、その変異部位を同定することによってクエン酸輸送タンパク質の構造と機能の関係を解析した。通常CitAタンパク質が基質として認識できないイソクエン酸を利用できるようになった変異株を単離し、9株の変異アミノ酸残基を同定した。その結果、それぞれの変異株において単一アミノ酸残基の置換が認められ、計7カ所のアミノ酸残基に変異が見つかった(2株は同一アミノ酸残基の変異)。そして、それらのアミノ酸残基をCitAタンパク質の推定トポロジーモデル上に位置付けた。同定された変異アミノ酸残基は、一次構造上、隣接した位置に存在していなかったが、高次構造上基質認識部位またはその近傍に位置することが示唆された(論文投稿中)。本研究の結果より、輸送タンパク質の基質認識と高次構造(特に膜貫通領域とループ領域の関係)に関する重要な情報が得られた。現在タンパク質の高次構造を決定するための最も有力な方法は、X線結晶構造解析である。そのためには、輸送タンパク質を大量に精製し、結晶化する必要がある。一般的に、輸送タンパク質のような膜タンパク質の大量発現、精製は極めて困難であり、結晶化にいたってはほとんど成功例がない。本研究においてクエン酸輸送タンパク質の精製を行うことはできなかったが、今後は大量発現系を構築することによって輸送タンパク質の精製と詳細な高次構造の解析を目指したい。

Dynamic transport, maintenance of homeostasis in cells, uptake of nutrients, excretion of harmful substances, and important services The relationship between higher-order structure and function is unknown. This study aims to analyze the relationship between structure and function of CitA acid transporter in Salmonella typhinmurium. Citroen is the most common type of plant. It is the most common type of plant. As a result, the substitution of acid residues in different strains was recognized, and the variation of acid residues in different strains was calculated (2 strains were different from the same acid residue). The position of the putative acid residue on the citrine is determined by the following: The same acid residues are present in adjacent positions on the primary structure and in adjacent positions on the higher structure (in submission). The results of this study provide important information on the understanding of transport matrix and higher-order structures (especially the relationship between membrane penetration and region). The most powerful method for determining the quality of high-order structures is X-ray crystallographic analysis. A large amount of purification and crystallization is necessary for the transportation of materials. General, transport, film, mass production, refining, crystallization, success This study is aimed at the analysis of high-order structures in acid transport and purification, and the construction of a large number of future discovery systems.