骨芽細胞様細胞に機械的刺激を加えた際のサイトカイン発現様相について

对成骨细胞样细胞施加机械刺激时细胞因子的表达

• 批准号: 07857151
• 负责人: 森山 啓司
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07857151/
• 关键词: 骨芽細胞; 歯根膜細胞; 口蓋粘膜細胞; 機械的刺激; interleukin-6

ヒト骨肉腫由来骨芽細胞様細胞MG63を、底面が可動性を有する培養用シャーレを用いて培養し、Flexercell Strain Unitを用いて底面に陰圧を加え、細胞に反復伸展性刺激を加えた。また、対照群としては、底面が可動性を有さないシャーレを用いて培養を行い、cAMP産生量の変化について検討を行ったところ、刺激の有無による有意な差を見出すことはできなかった。そこで、当初の実験計画を変更し、MG63の他に、ヒト歯根膜線維芽細胞(PDLF)、ヒト口蓋粘膜線維芽細胞(PTF)を加えた3種類の細胞をそれぞれコラーゲンゲル中で培養し、ゲルがシャーレに張り付いた状態で培養する群(attatch群)と、ゲルをシャーレから剥がして張力を解放させた状態で培養する群(release群)に分け、骨代謝との関わりが深いサイトカイン、interleukin-6(IL-6)の培養上清中への放出量を、ELISA法を用いて比較検討した。なお、release群におけるゲル収縮量は、PDLF,PTF,MG63の順で大きかった。まず、PDLFのattatch群では、培養開始48時間後に回収した培養上清に比べ、次の48時間、すなわち培養開始48時間から96時間後に回収した培養上清の方が約2倍高い濃度のIL-6を含んでいることが明らかとなった。また、release群では最初の48時間と次の48時間のIL-6放出量に有意な差を認めず、いずれもattatch群の最初の48時間のものと同等レベルであった。一方、PTFのattatch群では、PDLF同様、最初の48時間に比べ、次の48時間の方がIL-6放出量が多かったが、release群の放出量はいずれの時間帯においてもattatch群の10-15%程度と低い値にとどまっていることが分かった。また、MG-63の培養上清中にはIL-6を検出することは出来なかった。以上の結果より、ヒト歯根膜由来線維芽細胞やヒト口蓋粘膜由来線維芽細胞に力学的刺激を加えると、これらの細胞のサイトカイン産生に大きな変化が生じることが明らかとなった。

ヒ ト flesh swelling origin bone bud cells others MG63 を, bottom を が mobility す る training with シ ャ ー レ を with い て し, Flexercell Strain Unit を with い て underside に Yin 圧 を え, stretch cells に repeated sexual stimulation を plus え た. ま た, according to the group of seaborne と し て は, bottom を が mobility さ な い シ ャ ー レ を with い て discharge line cultivate を い, cAMP の variations change に つ い て 検 line for を っ た と こ ろ, stimulate の presence of に よ る intentionally な poor を see out す こ と は で き な か っ た. そ こ で, original の be 験 project を - more し, MG63 の に, ヒ ト 歯 membrane thread d bud cells (PDLF), ヒ ト flap mucosa line d bud cells (PTF) を え た 3 kinds の cells を そ れ ぞ れ コ ラ ー ゲ ン ゲ ル で in cultivating し, ゲ ル が シ ャ ー レ に zhang り pay い た state で cultivate す る group (attatch group) と, ゲ ル を シ ャ ー レ か ら peel が し て tension を liberation さ せ た state で cultivate す る group (release) に け, bone metabolism と の masato わ り が deep い サ イ ト カ イ ン, interleukin 6 (IL - 6) の culture supernatant of へ を の release quantity, ELISA method を い て compare beg し 検 た. Youdaoplaceholder0, release group におけるゲ った shrinkage におけるゲ, PDLF,PTF,MG63 <s:1> cis で large で った った った. ま ず, PDLF の attatch group で は, cultivation began after 48 time に back 収 し た culture supernatant に than べ, の 48 time, す な わ ち culture began to 48 time か ら に back after 96 time 収 し た culture supernatant の party が about 2 times the high concentration of い の IL - 6 を ん で い る こ と が Ming ら か と な っ た. ま た, release group で は initially の 48 time と times の 48 の IL - 6 release quantity に intentionally な poor を recognize め ず, い ず れ も attatch group の initially の 48 の も の と equal レ ベ ル で あ っ た. Side, PTF の attatch group で は, PDLF with others, initially の 48 に の than べ, times の 48 square が IL - more than six release quantity が か っ た が, release group の release quantity は い ず れ の time 帯 に お い て も attatch group の low degree of 10-15% と い numerical に と ど ま っ て い る こ と が points か っ た . Youdaoplaceholder0, in the supernatant of MG-63 <s:1> culture, に に IL-6を検 is released する な と is released な な った った. の above results よ り, ヒ ト 歯 membrane origin thread d bud cells や ヒ ト flap mucosa origin line d mechanical stimulation を に add bud cells え る と, こ れ ら の cells の サ イ ト カ イ impact ン に き な variations change が raw じ る こ と が Ming ら か と な っ た.

项目成果

Keiji Moriyama: "Herbimycin A,a Tyrosine Kinase Inhibitor Impairs Hypercalcemia Associated With a Human Squamous Cancer Producing Interleukin-6 in Nude Mice" Journal of Bone Mineral Research. 11(発表予定). (1996)

Keiji Moriyama：“Herbimycin A，一种酪氨酸激酶抑制剂会损害与裸鼠中产生白细胞介素 6 的人类鳞状细胞癌相关的高钙血症”，骨矿物质研究杂志 11（即将出版）。