マウス中胚葉誘導における転写調節因子の検索

寻找小鼠中胚层诱导中的转录调节因子

• 批准号: 07858083
• 负责人: 三木 清史
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07858083/
• 关键词: 中胚葉; 転写調節; 遺伝子発現; シスエレメント; GATA因子

マウス中胚葉は、受精6.5日目頃に外胚葉から剥離した細胞が原条へ移動する過程で形成される。T遺伝子は原条の細胞で特異的に発現した後に脊索と尾芽に発現が限定される遺伝子である。申請者らは、中胚葉の分化とその形質維持に不可欠なT遺伝子を中胚葉細胞のマーカー遺伝子として捉え、その発現制御機構を胎児性癌細胞P19を用いて解析した。P19細胞をジメチルスルホキシド存在下で懸濁培養するとT遺伝子の発現が一過的に誘導されることから、5'上流域の欠失変異体にCAT遺伝子を連結したプラスミドを作製して発現制御領域を検索したところ、-299/-192と-192〜-128の2カ所にプロモーター活性を示す領域の存在が確認できた。これらの領域のDNAをプローブに用いてゲルシフト解析を行うと、それぞれの領域に結合するタンパク質が存在し、DNAとの結合活性の消長はT遺伝子の発現と同調していた。2つの領域のうち-192〜-128についてフットプリント解析を行ったところ、結合部位は-158〜-143の14bpであった。この部位に変異を導入するとプロモーター活性が消失することから、この配列が不可欠な制御エレメントとしてT遺伝子の発現に機能していることがわかった。また、その部位にはGATA因子の認識配列が含まれており、実際DMSO存在下で2日間懸濁培養したP19細胞には少なくともGATA2、3および4の発現が認められた。これらの結果から、GATA因子(群)が背腹軸の決定と連動して腹側中胚葉で何らかの機能をしていることが想定された。

The mesoderm is formed on the 6.5th day of fertilization, and the ectodermal layer is peeled off and moved. The original cells of the T are the specific ones, and the notochord and the tail bud are the specific ones. The applicant is responsible for the differentiation of the mesoderm and the maintenance of the shape and quality of the mesoderm. The control mechanism of カー伝子として was captured and the control mechanism of fetal cancer cell P19 was analyzed by いて. P19 cells were cultured in suspension in the presence of をジメチルスルホキシド. Passed に induced されることから, 5' upper basin の owed loss of the alien body CAT left 伝子 を connection し たプラスミドをproduced して発existing control domain を検SO したところ、-299/-192と- 192~-128の2カにプロモーターActivity shows the existence of the field and confirms it.これらの地のDNAをプローブに Use いてゲルシフト to analyze を行うと, それぞれの地に knot The existence of the combined nature and the binding activity of DNA are the same as the growth and decline of the binding activity of the DNA. 2つの区のうち-192~-128についてフットプリントanalytic を行ったところ, binding site は-158~-143の14bp であった.この parts に変different を introduction するとプロモーターactive がdisappear することから、このmatched arrangement がDon't be indebted to the エレメントとしてT legacy 伝子の発appears に function していることがわかった.また, その区にはGATA factor のcognition arrangement がまれており, 実记DMSO presence で2 The P19 cells were cultured in a medium suspension and the GATA2 and GATA2, 3 and 3 cells were cultured.これらのRESULTS から、GATA factor (group) がdorsoventral axis のdetermination and linkage してventral mesoderm でらかのfunction をしていることがconcept された.

项目成果

Naoshi Dohmae: "Purification and charicterization of intracellular proteinases in Pleurotus ostereatus fruiting bodies." Biosci.Biotech.Biochem.59. 2074-2080 (1995)

Naoshi Dohmae：“侧耳子实体细胞内蛋白酶的纯化和表征。”

Hoon Jeon: "Pericytes from microvessel fragment produce typIV collagen,entactin/nidogen and multiple lamjnin isoforms." Biosci.Biotech.Biochem.(in press). (1996)

Hoon Jeon：“来自微血管片段的周细胞产生 IV 型胶原、巢蛋白/巢蛋白和多种层粘连蛋白亚型。”