エンドセリン-1によるアポートシスの制御

内皮素-1 控制细胞凋亡

• 批准号: 08671140
• 负责人: 七里 眞義
• 金额: $ 1.54万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671140/
• 关键词: エンドセリン; 血管内皮細胞; アドレノメデュリン; ET_A受容体; ET_B受容体

血管内皮細胞を無血清培養培地に交換したのち、時間経過とともに出現する浮遊死細胞を集めてDNAを抽出し、terminal transferaseにより^<32>P標識dideoxyATPを用いて3′-end labelingを行い、DNA fragmentationを検出、さらに、血清除去後、subnuclear bodyやクロマチンの濃縮像など、アポートシスに特徴的な所見の出現を形態学的に検討した。さらに、血管内皮細胞から産生されるエンドセリン-1やアドレノメデュリンなどの血管作動性因子が、c-Myc依存性アポートシスを制御するかどうかを調べた。エンドセリン-1・アドレノメデュリンは血清除去後アポートシスを濃度依存性に抑制した。エンドセリン-1の作用は内皮に発現しているET_B受容体を介して作用していた。また、血管内皮は大量のエンドセリン-1を産生・分泌していた。血管内皮には単一で高親和性のアドレノメデュリン受容体の存在を認めた。また、内皮にはAMmRNA(1.6kb)が発現し、培養上清中にAM様免疫活性を認めた。これらのことから、エンドセリン・アドレノメデュリンがオートクリン/パラクリン因子として、アポートシスの制御に関与しているのではないかとの仮設のもとに、培養上清中に抗ラットエンドセリン抗体・および抗ラットアドレノメデュリン抗体を添加し産生されたエンドセリン・アドレノメデュリンを中和したところ、アポートシスは著明に増加した。内皮はアドレノメデュリンにより濃度依存性にcAMP産生を増加させた。しかし、アドレノメデュリンのアポートシス抑制効果はcAMP阻害薬(Rp-cAMP)により影響を受けなかった。Forskolin(10^<-5>M)、Prostaglandin I_2(10^<-6>M)はcAMP産生を促進したにもかかわらず、アポートシス抑制作用は示さなかった。アドレノメデュリンのアポートシス抑制作用はそのcAMP産生促進作用と一致しないことから、cAMP以外の情報伝達経路が関与している可能性が考えられた。

Vascular endothelial cells in serum-free culture culture を に exchange し た の ち, time 経 と と も に appear す る dead phytoplankton cells を set め て DNA を spare し, terminal transferase に よ り ^ < > 32 P logo dideoxyATP を with い て 3 '- end labeling line を い, DNA Fragmentation を 検, さ ら に, serum after removing, subnuclear body や ク ロ マ チ ン の enrichment as な ど, ア ポ ー ト シ ス に, 徴 の な see appear を morphology に beg し 検 た. さ ら に, vascular endothelial cells か ら produce さ れ る エ ン ド セ リ ン - 1 や ア ド レ ノ メ デ ュ リ ン な ど の vascular actuation factor が, c - Myc dependency ア ポ ー ト シ ス を suppression す る か ど う か を adjustable べ た. Youdaoplaceholder0, ドセリ, ドセリ -1 · アドレノメデュリ, <e:1>, ドセリ. After serum removal, アポ, トシスを, トシスを concentration-dependent に inhibition of <s:1> た. の エ ン ド セ リ ン - 1 role は endothelial に 発 now し て い る ET_B を interface by let body し て role し て い た. Youdaoplaceholder0, the vascular endothelium <s:1> produces a large amount of エ エ ドセリ ドセリ ドセリ -1を and secretes て た た た. Vascular endothelium に 単 単 で high-affinity <s:1> アドレノメデュリ <s:1> acceptors <e:1> are present を recognition めた. Youdaoplaceholder0, endothelial に に AMmRNA(1.6kb)が showed に, and the にAM immune activity in the culture supernatant を recognized めた. こ れ ら の こ と か ら, エ ン ド セ リ ン · ア ド レ ノ メ デ ュ リ ン が オ ー ト ク リ ン / パ ラ ク リ ン factor と し て, ア ポ ー ト シ ス の suppression に masato and し て い る の で は な い か と の 仮 set の も と に, culture supernatant of に resistance ラ ッ ト エ ン ド セ リ ン antibodies, お よ び resistance ラ ッ ト ア ド レ ノ メ デ ュ リ antibodies ン を add し さ れ た エ ン ド セ リ ン · ア ド レ ノ メ デ ュ リ ン を neutralization し た と こ ろ, ア ポ ー ト シ ス は with Ming に raised し た. Endothelial アドレノメデュリ アドレノメデュリ によ によ concentration-dependent にcAMP produces を increase させた. し か し, ア ド レ ノ メ デ ュ リ ン の ア ポ ー ト シ ス inhibition of unseen fruit は cAMP resistance against 薬 (Rp - cAMP) に よ り を by け な か っ た. Forskolin (10 ^ < - > 5 M), Prostaglandin I_2 (10 ^ 6 < - > M) は cAMP produce を promote し た に も か か わ ら ず, ア ポ ー ト シ ス は inhibition role さ な か っ た. ア ド レ ノ メ デ ュ リ ン の ア ポ ー ト シ ス inhibition は そ の cAMP have promote と consistent し な い こ と か ら, cAMP outside の intelligence 伝 経 road が masato and し て い る possibility が exam え ら れ た.

项目成果

Kato H.et al.: "Adrenomedullin as an Autocrine/Paracrine Apoptosis Survival Factor for Rat Endothelial Cells." Endocrinology. (in press). (1997)

Kato H.等人：“肾上腺髓质素作为大鼠内皮细胞的自分泌/旁分泌凋亡存活因子。”

Hirata Y.et al.: "Increased circulating adrenomedullin,a novel vasodilatory peptide in Sepsis" J.Clin.Endcrinol Metal. 81. 1449-1453 (1996)

Hirata Y.等人：“循环肾上腺髓质素增加，脓毒症中的一种新型血管舒张肽”J.Clin.Endcrinol Metal。

七里眞義他: "エンドセリン" 医学のあゆみ. 179. 775-778 (1996)

Mayoshi Shichiri 等：“内皮素”医学史 179. 775-778 (1996)

Iwasaki H.et al: "Specific binding sixes for Proadrenomedullin,N-terminal 20 peptide (PAMP) in the rat" Endocrinology. 137. 3045-3050 (1996)

Iwasaki H.等人：“大鼠中肾上腺髓质素原、N 末端 20 肽 (PAMP) 的特异性结合”内分泌学。