バイオインフォマティクスを応用した新規血管作動性ペプチドの探索

利用生物信息学寻找新的血管活性肽

• 批准号: 14013021
• 负责人: 七里 眞義
• 金额: $ 4.48万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14013021/
• 关键词: バイオインフォマティクス; 血管作動性ペプチド

各種データベースに登録されている数多くの機能不明な遺伝子について、(1)シグナルIPサーバーWeb site検索から明らかなシグナル配列を有し、(2)preproproteinの全長は100〜250アミノ酸で、(3)構造上dibasicアミノ酸を有するため小分子量(約20アミノ酸以下)にプロセシングされると期待されるputative endogenous peptideを多数選択し、当該遺伝子配列から推測されるプロセシング後のペプチドを数多く化学合成した。これら合成ペプチドを順次、静止期培養血管平滑筋細胞に添加し、(1)Real-time RT-PCRによってc-myc、c-fos mRNA量を定量してペプチド添加後に著明な上昇を示すもの、(2)強力な細胞内Ca^<2+>上昇作用を有するを選択した。また(3)実際にヒト組織中に発現しているものを選択するために、それぞれの遺伝子配列をもとにRT-PCR用primerを作成し、市販のヒト臓器由来cDNAを用いて主要臓器や血管内皮などに発現が認められるか検討している。これらの候補ペプチドについて血管収縮/弛緩活性、血圧制御作用などを検討することにより機能解析を進めている。さらに同定したペプチドをコードする遺伝子を発現させ、実際にペプチドが産生・分泌されるかどうかを調べるため、経トランスフェリン受容体遺伝子導入法を改善し、簡便で高効率の遺伝子導入法を見いだすに至った(Gene Therapy 2003 in press)。本導入法の有用性はin vivo遺伝子導入によっても明らかな発現と臨床的効果が得られたことによって確認することができた。

对于许多在各个数据库中注册的未知功能基因，（1）从信号IP服务器网站上的搜索中清除了信号序列，（2）的总长度为100至250个氨基酸，（3）具有二丁氨基氨基酸结构，并且许多假定的内源性肽被预期的较小的分子酸（或多个分子酸）处理（大约是20 amino酸），或者是较小的20 amino酸的酸度，而又有20个氨基酸的酸度，则是一定的20个氨基酸的酸性氨基酸酸性。基因序列是化学合成的。将这些合成肽连续添加到静态培养的血管平滑肌细胞中，并选择（1）通过实时RT-PCR量化C-Myc和c-Fos mRNA的量，以在添加肽后显示出明显的增加，并且（2）具有有效的细胞内Ca^<2+> - 升高的效果。此外，（3）为了选择在人体组织中实际表达的那些，基于每个基因序列创建了RT-PCR的引物，并使用人类器官的商业可用cDNA来确定在主要器官，血管内皮的主要器官中是否可以观察到表达。此外，为了表达编码已鉴定的肽的基因并确定是否实际产生和分泌肽，我们改善了反移铁蛋白受体基因转移的方法，并找到了一种简单且高效的基因转移方法（Gene Therapy therapy in Press In Press中）。这种引入方法的有用性可以通过体内基因转移的明显表达和临床作用来证实。

项目成果

Shichiri M, et al.: "Genetic and Epigenetic Inactivation of Mitotic Checkpoint Genes hBUB1 and hBUBR1 and Their Relationship to Survival"Cancer Research. 62. 13-17 (2002)

Shichiri M 等人：“有丝分裂检查点基因 hBUB1 和 hBUBR1 的遗传和表观遗传失活及其与生存的关系”癌症研究。

Shichiri et al.: "Adrenomedullin is an autocrine / paracrine growth factor for rat vascular smooth muscle cells"Regulatory Peptide. (in press). (2003)

Shichiri等人：“肾上腺髓质素是大鼠血管平滑肌细胞的自分泌/旁分泌生长因子”调节肽。

Matsushita et al.: "Urotensin II is an autocrine / paracrine growth factor for porcine renal epithelial cell line, LLCPK1"Endocrinology. (in press). (2003)

Matsushita 等人：“尾加压素 II 是猪肾上皮细胞系的自分泌/旁分泌生长因子，LLCPK1”内分泌学。

Doi M, et al.: "Cytokine-activated Jak-2 is involved in inducible nitric oxide synthase expression independent from NF-κB activation in vascular smooth muscle cells"Atherosclerosis. 160. 123-132 (2002)

Doi M 等人：“细胞因子激活的 Jak-2 参与诱导型一氧化氮合酶表达，与血管平滑肌细胞中 NF-κB 的激活无关”，《动脉粥样硬化》。

Fukai N, et al.: "Coexpression of Calcitonin Receptor-Like Receptor and Receptor Activity-Modifying Protein 2 or 3 Mediates the Anti-migratory Effect of Adrenomedullin"Endocrinology. 144. 447-453 (2003)

Fukai N等人：“降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白2或3的共表达介导肾上腺髓质素的抗迁移作用”内分泌学。