バイオインフォマティクスを応用した新規血管作動性ペプチドの探索

利用生物信息学寻找新的血管活性肽

• 批准号: 14013021
• 负责人: 七里 眞義
• 金额: $ 4.48万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14013021/
• 关键词: バイオインフォマティクス; 血管作動性ペプチド

各種データベースに登録されている数多くの機能不明な遺伝子について、(1)シグナルIPサーバーWeb site検索から明らかなシグナル配列を有し、(2)preproproteinの全長は100〜250アミノ酸で、(3)構造上dibasicアミノ酸を有するため小分子量(約20アミノ酸以下)にプロセシングされると期待されるputative endogenous peptideを多数選択し、当該遺伝子配列から推測されるプロセシング後のペプチドを数多く化学合成した。これら合成ペプチドを順次、静止期培養血管平滑筋細胞に添加し、(1)Real-time RT-PCRによってc-myc、c-fos mRNA量を定量してペプチド添加後に著明な上昇を示すもの、(2)強力な細胞内Ca^<2+>上昇作用を有するを選択した。また(3)実際にヒト組織中に発現しているものを選択するために、それぞれの遺伝子配列をもとにRT-PCR用primerを作成し、市販のヒト臓器由来cDNAを用いて主要臓器や血管内皮などに発現が認められるか検討している。これらの候補ペプチドについて血管収縮/弛緩活性、血圧制御作用などを検討することにより機能解析を進めている。さらに同定したペプチドをコードする遺伝子を発現させ、実際にペプチドが産生・分泌されるかどうかを調べるため、経トランスフェリン受容体遺伝子導入法を改善し、簡便で高効率の遺伝子導入法を見いだすに至った(Gene Therapy 2003 in press)。本導入法の有用性はin vivo遺伝子導入によっても明らかな発現と臨床的効果が得られたことによって確認することができた。

Various デ ー タ ベ ー ス に login さ れ て い る more く の function unknown な heritage 伝 son に つ い て, (1) シ グ ナ ル IP サ ー バ ー Web Site 検 cable か ら Ming ら か な シ グ ナ ル go を し, (2) preproprotein の は 2 100 ~ 1 250 ア ミ ノ on dibasic acid で, (3) structure ア ミ ノ acid を have す る た め small molecular weight (about 20 ア ミ ノ acid) に プ ロ セ シ ン グ さ れ る と expect さ れ る putative Endogenous peptide を most sentaku し, when the son survived 伝 match column か ら speculation さ れ る プ ロ セ シ ン グ after の ペ プ チ ド を more く chemical synthesis し た. こ れ ら synthetic ペ プ チ ド を progressive, stationary phase training に add し, vascular smooth muscle cells (1) the Real - time rt-pcr に よ っ て - myc, c - c fos Amount of mRNA を quantitative し て ペ プ チ ド に after adding the Ming な rise を shown す も の, powerful な intracellular Ca (2) ^ 2 + > < rising role を す る を sentaku し た. ま た (3) the event be に ヒ ト organization に 発 now し て い る も の を sentaku す る た め に, そ れ ぞ れ の heritage 伝 with sequence を も と に rt-pcr with primer を made し, city vendor の ヒ ト viscera origin cDNA を with い て main viscera や endothelial な ど に 発 が now recognize め ら れ る か beg し 検 て い る. こ れ ら の alternate ペ プ チ ド に つ い て vascular 収 shrinkage/relaxation activity, blood 圧 suppression effect な ど を beg す 検 る こ と に よ り function analytical を into め て い る. さ ら に with fixed し た ペ プ チ ド を コ ー ド す る posthumous son 伝 を 発 now さ せ, be interstate に ペ プ チ ド が produce, secrete さ れ る か ど う か を adjustable べ る た め, 経 ト ラ ン ス フ ェ リ ン by let body heritage 伝 を improve し import method, simple で traces of high rate of unseen の 伝 son see import method を い だ す に to っ た (2003 in Gene Therapy (press). This import method の usefulness は in vivo heritage 伝 son import に よ っ て も Ming ら か な 発 と clinical services now fruit が must ら れ た こ と に よ っ て confirm す る こ と が で き た.

项目成果

Shichiri M, et al.: "Genetic and Epigenetic Inactivation of Mitotic Checkpoint Genes hBUB1 and hBUBR1 and Their Relationship to Survival"Cancer Research. 62. 13-17 (2002)

Shichiri M 等人：“有丝分裂检查点基因 hBUB1 和 hBUBR1 的遗传和表观遗传失活及其与生存的关系”癌症研究。

Shichiri et al.: "Adrenomedullin is an autocrine / paracrine growth factor for rat vascular smooth muscle cells"Regulatory Peptide. (in press). (2003)

Shichiri等人：“肾上腺髓质素是大鼠血管平滑肌细胞的自分泌/旁分泌生长因子”调节肽。

Doi M, et al.: "Cytokine-activated Jak-2 is involved in inducible nitric oxide synthase expression independent from NF-κB activation in vascular smooth muscle cells"Atherosclerosis. 160. 123-132 (2002)

Doi M 等人：“细胞因子激活的 Jak-2 参与诱导型一氧化氮合酶表达，与血管平滑肌细胞中 NF-κB 的激活无关”，《动脉粥样硬化》。

Fukai N, et al.: "Coexpression of Calcitonin Receptor-Like Receptor and Receptor Activity-Modifying Protein 2 or 3 Mediates the Anti-migratory Effect of Adrenomedullin"Endocrinology. 144. 447-453 (2003)

Fukai N等人：“降钙素受体样受体和受体活性修饰蛋白2或3的共表达介导肾上腺髓质素的抗迁移作用”内分泌学。

Shichiri M, et al.: "Intravenous gene therapy for familial hypercholesterolemia using ligand-facilitated transfer of a liposome : LDL receptor gene complex"Gene Therapy. (in press). (2003)

Shichiri M 等人：“利用脂质体的配体促进转移对家族性高胆固醇血症进行静脉基因治疗：LDL 受体基因复合物”基因治疗。