造血器腫瘍の遺伝子異常に基づいたアンチセンス治療法の開発

基于造血肿瘤遗传异常的反义疗法的发展

• 批准号: 08671248
• 负责人: 前川 平
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08671248/
• 关键词: 造血器腫瘍; アンチセンス・オリゴヌクレオチド; 遺伝子異常; 慢性骨髄性白血病

最近、造血器腫瘍の病態が遺伝子レベルで解明され、得られた知見は遺伝子診断として臨床に還元されつつある。しかし、治療に関しては、レチノイン酸による急性前骨髄球性白血病の分化誘導療法以外に、分子標的を明確にしたものはないと言わざるを得ない。したがって次の目標は、異常遺伝子やその転写産物自体を標的とする疾病特異的な治療法の開発である。我々は平成8年度科学研究費の補助をうけ、活性化あるいは増幅された癌遺伝子に対するアンチセンス・オリゴヌクレオチド(AS ODN)を用いて白血病細胞の増殖抑制とその機序を検討してきた。本年度に得られた成果を下記にあげる。(1)慢性骨髄性白血病(CML)の特異的再構成遺伝子BCR-ABLに対するAS ODNがCML細胞の増殖を抑制し、その機序はアポトーシスの誘導であることを報告した。(2)c-myc AS ODNでc-mycの発現を低下させると白血病細胞株HL60の増殖が抑制され、さらにその状態からc-mycの発現を急に増強させると、G_1/S期境界の細胞が選択的に、かつ大量にアポトーシスをおこすことを見い出した。(3)がん抑制遺伝子WT1が白血病細胞で特異的に増幅されていることから、WT1に対するAS ODNを作製し検討したところ、K562などの白血病細胞株や新鮮白血病細胞の増殖を抑制できることを見い出した。これらの研究を通じ、AS ODNの作用機序、細胞膜透過性や至適培養条件、標的配列の選択基準などについて検討を行い、種々の問題点を指摘するとともに、数多くのノウハウを蓄積してきた。今後解決すべき問題点としては、低濃度での配列特異的な作用発現に必要なAS分子の設計、腫瘍細胞の増殖抑制を図るための標的遺伝子配列の選択、エンドサイトーシスによる細胞に取り込まれたAS ODNが、リソソームにトラップされずに標的mRNAと結合できるようなドラッグ・デリバリー・システムの開発があげられる。

Recently, haematopoietic cysts have been diagnosed as pathologies, and have been diagnosed as pathologies. In addition to differentiation induction therapy for acute preosteoblastic leukemia, molecular targets are clearly identified. The purpose of this study is to develop disease-specific therapies for the treatment of diseases, abnormal genes, and self-targeting products. We will continue to explore mechanisms for leukemia cell proliferation inhibition by increasing funding and activating research grants for cancer gene therapy in 2008. This year's results are recorded below. (1)This paper reports that ASODN inhibits the proliferation of CML cells and induces the growth of other mechanisms in patients with chronic osteopathic leukemia (CML). (2) The expression of c-myc in ODN of c-myc AS decreased, and the proliferation of leukemia cell line HL60 was inhibited, and the expression of c-myc increased rapidly. (3)It has been found that the inhibitory gene WT1 can specifically increase the proliferation of leukemia cells, and the AS ODN produced by WT1 can inhibit the proliferation of K562 leukemia cell lines and fresh leukemia cells. This study focuses on the following aspects: the mechanism of ASODN, cell membrane permeability, suitable culture conditions, selection criteria for target arrangement, selection of problems, and accumulation of ASODN. In the future, it is necessary to design AS molecules, select target gene sequences, and select target genes for cell proliferation inhibition at low concentrations to solve the problem of sequence-specific effects.

项目成果

前川 平: "白血病のアンチセンス療法" Human Cell. 9. 17-24 (1996)

Taira Maekawa：“白血病的反义疗法”《人类细胞》9. 17-24 (1996)。

Yamagami T et al.: "Growth inhibition of human leukemia cells by WT1(Wilmstumor gene)antisense oligodeoxynucleotides" Blood. 87. 2878-2884 (1996)

Yamagami T 等人：“WT1（Wilmstumor 基因）反义寡脱氧核苷酸对人类白血病细胞的生长抑制”血液。

Iwase R et al.: "Fluorescent-labeled oligonucleotides for studies on gene structure" Nucleic Acids Symposium Series. (印刷中). (1996)

Iwase R 等人：“用于基因结构研究的荧光标记寡核苷酸”核酸研讨会系列（正在出版）。

Hirakawa K et al.: "Primary acute myeloid leukemia cells negative for c-kit receptur protein expression do not proliferate in vitro……." Leukemia. 10. 279-287 (1996)

Hirakawa K 等人：“c-kit 受体蛋白表达阴性的原发性急性髓性白血病细胞在体外不会增殖......”白血病。 10. 279-287 (1996)

Murakami A et al.: "Interaction of antisense oligonucleotides with DNA and proteins studied by fluorescence palarigation spectroscopy." Biotechnologica. (印刷中). (1996)

Murakami A 等人：“通过荧光排列光谱研究反义寡核苷酸与 DNA 和蛋白质的相互作用”（出版中）。