難治性癌に対するBcl-2アンチセンス治療法の開発

Bcl-2反义疗法治疗难治性癌症的进展

• 批准号: 13218032
• 负责人: 前川 平
• 金额: $ 2.43万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218032/
• 关键词: アンチャンス; Bcl-2; ドラッグ・デリバリー・システム

現在、アンチセンス(AS)・オリゴヌクレオチドの研究や欧米で行われている臨床治験には、ホスホロチオエート(PS)型の核酸分子が用いられている。しかし、エンドサイトーシスによって細胞内に取り込まれたAS分子はエンドゾームにトラップされてしまい、効果を発揮させるためには大量の核酸分子を必要とする。また、PS型分子が蛋白質と非特異的に結合するため、非アンチセンス効果がしばしば認められるなどの欠点があった。我々はPS型分子とホスホジエステル型のキメラ型分子は非アンチセンス効果が少ないことを報告してきたが、今回ethoxylated polyethylenimine(EPEI)をもちいて検討したところ、以下の結果を得た。(1)アンチセンス核酸の分子設計:あたらしく考案したモルフォリノ・アンチセンスオリゴヌクレオチド核酸分子を合成し、その精製方法を確立した。(2)上記のアンチセンス核酸分子は非特異的に蛋白質と結合したり、Bリンパ球を非特異的に刺激するなどの非特異的作用や非アンチセンス作用を示す程度が少ないことを示した。(3)エンドゾーム膜をpH依存性にpermeablizeさせるethoxylated polyethylenimine(EPEI)をもちいた細胞内へのアンチセンス核酸分子の取り込み効率を検討した。その結果、エンドゾーム内は酸性に保持されており、これをリン脂質を結合させたモルフォリノ分子をもちいて、エンドゾーム内のpHを中性にさせることにより、エンドゾーム内にトラップされたアンチセンス分子が細胞質内に再放出される現象を見い出した。(4)HL60(Bcl-2高発現)を対象とし、EPEIの陽性荷電部位をAS分子の陰性荷電部位と結合させたBcl-2AS分子(開始コドンをはさんだ配列)をもちい、増殖に及ぼす影響、Bcl-2蛋白量、アポトーシス誘導の程度を検討した。その結果、従来の検討では、効果を発揮させるのに必要なAS分子は10μM以上必要であったが、EPEIをもちいた検討では10ないし100nMでほぼ同様の増殖抑制効果が得られた。以上のことから、EPEIはAS分子の細胞質内へのdrug delivery systemとして有用である可能性が示唆された。

Now, the nucleic acid molecule of type A (AS), type B (PS) and type C (AS) can be used in clinical treatment. A large number of nucleic acid molecules are necessary for the development of intracellular AS molecules. The PS-type molecules bind to non-specific proteins, and the non-specific proteins bind to non-specific proteins. The following results were obtained from the study of PS type molecules and ethylated polyethylenimine(EPEI). (1)Molecular design of nucleic acids: establishment of methods for synthesis and purification of nucleic acid molecules (2)Note that nucleic acid molecules bind to non-specific proteins, B molecules, and non-specific stimuli to a lesser extent. (3)To investigate the pH-dependent permeability of the membrane to ethoxylated polyethylenimine(EPEI). As a result, the phenomenon of acid retention, lipid binding, molecular dissociation, pH neutrality, and cytoplasmic re-release of molecules in the cytoplasm has been observed. (4) To investigate the effects of HL60 (Bcl-2 highly expressed) on the growth, proliferation and apoptosis of Bcl-2 protein, and the degree of apoptosis induced by EPEI on the positive-charged site and negative-charged site of AS molecule, as well as on the binding of Bcl-2 AS molecule (the initial site). As a result, the growth inhibition effect of AS molecules above 10μM was obtained. These findings suggest that EPEI may be useful in the intracellular drug delivery system of AS molecules.

项目成果

Nagayama, H. et al.: "Phase I clinical trial of immunotherapy with lysate-pulsed monocyte-derived dendritic cells"Int. J. Cancer. (印刷中). (2002)

Nagayama, H. 等人：“利用裂解物脉冲的单核细胞衍生的树突状细胞进行免疫治疗的 I 期临床试验”，《癌症杂志》（2002 年出版）。

Tomonari, A. et al.: "Severe autoimmune thrombocytopenia after allogeneic bone marrow transplantation for aplastic"Int. J. Hematol.. 74(2). 228-232 (2001)

Tomonari, A. 等人：“再生障碍性同种异体骨髓移植后严重自身免疫性血小板减少症”Int。

Miyamoto, S. et al.: "Inhibitory effect of interleukin-3 on the early development of human B-lymphopoiesis"Brit. J. Hematol.. 114(3). 690-697 (2001)

Miyamoto, S. 等人：“白细胞介素 3 对人类 B 淋巴细胞早期发育的抑制作用”Brit。

Yoshimasu, T. et al.: "Prompt and durable hematopoietic reconstitution by unrelated cord blood transplantation in a child"Bone Marrow transplant. 27. 767-769 (2001)

Yoshimasu, T. 等人：“通过不相关的脐带血移植对儿童进行迅速和持久的造血重建”骨髓移植。

Ma, F.et al.: "Development of human lymphohematopoietic stemlprogenitor cells defined by expression of CD34 and CD81"Blood. 97. 3755-3762 (2001)

Ma, F.等人：“通过表达 CD34 和 CD81 定义的人淋巴造血干细胞祖细胞的发育”血液。