肝細胞分化能をもつoval cellにおける転写制御因子の発現と機能

具有肝细胞分化潜能的卵圆细胞中转录调节因子的表达和功能

• 批准号: 10152202
• 负责人: 杉山 俊博
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Akita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10152202/
• 关键词: 肝癌; oval cell; LEC ラット; 肝臓幹細胞; 肝細胞分化; 肝特異的転写因子

【研究の目的】LECラットの肝臓から樹立したoval cellを肝臓に戻すと、現在のところ、肝細胞に分化できるが、胆管には分化できない。そこで、住友ベーク(株)が開発したコラーゲンゲルを用いた一〜三次元細胞培養系において、種々の増殖因子の存在下でびoval cellが胆管へ分化誘導できるかどうかを肝細胞転写制御因子の発現を指標にして検討した。【方法と結果】1) 三次元細胞培養系に用いるコラーゲンゲルは、ラット尾腱より精製したコラーゲンタイプIをペプシン処理を施した低架橋度のアテロコラーゲンゲルで、肝細胞を一次元〜三次元ゲル上(内)で培養することにより、Matrigelと同様な種々の形態をとることが判明した。二次元ゲル上では、肝細胞は、スフェロイド形成し、肝機能は長期間維持された。2) oval cellを三次元ゲル内でEGF10ng/ml存在下9日間培養したところ、管様構造を形成した。HGF10mg/mlでも同様な構造が観察できたが、EGFと比べてその効果は弱かった。3) oval cellを一次元ゲル上で、レチノイン酸(1μl)/EGF(10ng/ml)存在下で培養したところ、肝特異的転写因子HNF-4と胆管上皮細胞マーカーγGTPのそれぞれのmRNAの発現が増大した。一方、アルブミンmRNA発現量には影響しなかった。4) 肝特異的転写因子HNF-1αのcDNAを遺伝子導入したoval cellを一次元ゲル上で培養したところ、HNF-4の発現量が有意に増大した。

Purpose の [study] LEC ラ ッ ト の is crucial liver か ら set し た oval cell を routine liver に 戻 す と, now の と こ ろ, liver cells に で き る が, bile duct に は differentiation で き な い. そ こ で, sumitomo ベ ー ク (strains) が open 発 し た コ ラ ー ゲ ン ゲ ル を with い た three dimensional cell culture is a ~ に お い て, kind of 々 の raised the presence of colonization factor の で び oval cell が bile duct へ induction で き る か ど う か を liver cell planning write suppression factor の 発 now を index に し て beg し 検 た. 【 method と result 】1) Three dimensional cell culture system に with い る コ ラ ー ゲ ン ゲ ル は, ラ ッ ト tail tendon よ り refined し た コ ラ ー ゲ ン タ イ プ I を ペ プ シ ン 処 Richard を shi し た low degree of bridging の ア テ ロ コ ラ ー ゲ ン ゲ ル で, liver cell を a yuan ~ three yuan ゲ nurturing (within) で ル す る こ と に よ り, Matrigel と with others な kind 々 の form を と る こ と が Determine that the name is た. In the two-dimensional ゲ ド, で で, liver cells, and スフェロ <s:1> ド form <s:1>, and liver function <e:1> is maintained for a long time at された. 2) In the oval cellを three-dimensional ゲ た, でEGF10ng/ml was present for 9 days to cultivate <s:1> たと ろ ろ, and the tubular structure を formed た. The HGF10mg/mlで で is similar to the な structure が観 observation で たが たが たが, and the EGFと has a <s:1> weaker な った effect than the べてそ. 3) oval cell を a yuan ゲ ル で, レ チ ノ イ ン acid 1 mu (l)/EGF (10 ng/ml) in the presence of で cultivate し た と こ ろ, liver specific planning write factor HNF - 4 と bile duct epithelial cells マ ー カ ー gamma GTP の made そ れ ぞ れ の mRNA の 発 が now raised large し た. One party, the occurrence amount of ア ブ ブ ブ ブ <s:1> mRNA に affects <s:1> な った った った. 4) liver specific planning write factor HNF - 1 alpha の cDNA を posthumous son 伝 import し た oval cell を a yuan ゲ nurturing で ル し た と こ ろ, HNF - 4 の 発 が intentionally に raised large amount of now し た.

项目成果

Terada,k.: "Biliary excretion of copper in LEC ret after introduction of copper transporting P-type ATPase,ATP7B." FEBS Lett.in press (1999)

Terada,k.：“引入铜转运 P 型 ATP 酶 ATP7B 后，LEC ret 中铜的胆汁排泄。”

Terada, K.: "Restoration of holoceruloplasmin synthesis in LEC rat after infusion of recombinant adenovirus bearing WND cDNA." J.Biol.Chem.273. 1815-1820 (1998)

Terada, K.：“输注携带 WND cDNA 的重组腺病毒后，LEC 大鼠恢复全铜蓝蛋白合成。”

Terada K.: "ATP7B(WND)protein." Int.J.Biochem.Cell Biol.30. 1063-1067 (1998)

Terada K.：“ATP7B（WND）蛋白。”

Kawarada,Y.: "Antibody against single-stranded DNA useful for detecting apoptotic cells recognizes hexadeoxynucleotides with various base sequences." J.Biochem.123. 492-498 (1998)

Kawarada,Y.：“可用于检测凋亡细胞的单链 DNA 抗体可识别具有各种碱基序列的六脱氧核苷酸。”

Miura N.: "Mouse forkhead(winged helix)gene LUN encodes a transactivator that acts in the lung." Genomics. 50. 346-356 (1998)

Miura N.：“小鼠叉头（翼螺旋）基因 LUN 编码一种在肺部发挥作用的反式激活因子。”