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脳ホスホリパーゼDのクローニングと機能解析

脑磷脂酶D的克隆及功能分析

基本信息

批准号：
10155204
负责人：
山下哲
金额：
$ 0.96万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1. オレイン酸活性化型ホスホリパーゼD(PLD)精製の過程で酵素を強く阻害する脂質性阻害因子がブタ大腸粘膜に存在することを見出したのでそれらの精製,同定を行った.内在性PLD阻害因子はリゾホスファチジルセリン,ホスファチジルイノシトール,リゾホスファチジルイノシトールと同定された.またこれらのリン脂質をPLD1,PLD2,および脂肪酸依存性PLDに添加するといずれのPLDアイソホームも低濃度(10μMオーダー)で阻害した.2. 神経発生におけるPLDの役割を明らかにするためショウジョウバエのホスホリパーゼD遺伝子とcDNAをクローニングした.ショウジョウバエPLDは1278アミノ酸残基から成り,分子量は145Kであった.動植物,酵母のPLDで共通してみられる5個所のコンセンサスはすべて含まれており,PXドメイン,PHドメイン,および活性部位と考えられる2つのHKDモチーフは完全に保存されていた. dPLDとPLD1, PLD2との相同性はそれぞれ37,36%でそれらと等距離にあると考えられた.遺伝子は第2染色体(2R42A16-18)にマップされた. RNAプローブを作成し,in situ hybridizationによってPLDが発生のどの時期に発現するのか調べたところ,発生過程の中で卵,およびblastoderm初期にのみ発現しておりdPLDが発生初期に機能する酵素であることが示唆された.3. アナンダミドは1-アラキドノイルPCから合成されるが,この脂質がどのようにして生ずるのかわかっていなかった.最近我々が精製,クローニングした60Kリゾホスホリパーゼのトランスアシラーゼ活性を詳細に調べたところ,酵素は2-アラキドノイルリゾPCからアラキドン酸を別の分子の2-アラキドノイルリゾPCの1位に転移させる機能を有することが判明し,この酵素がアナンダミド合成の前駆体生成に関与していることが示唆された.

1. The purification process of acid activated D(PLD) is characterized by enzyme inhibition, lipid inhibition factor and purification of D(PLD). The internal resistance factors are: The addition of these lipids, PLD1,PLD2, and fatty acid dependent PLD, resulted in inhibition at low concentrations (10μM). 2. The gene expression of PLD is very important in the development of human brain. The molecular weight of PLD is 145K. Plants and animals, yeasts and PLD have five common sites, including PX,PH and active sites, which are completely preserved. The identity of PLD1, PLD2 is 37,36% and the distance is equal. Chromosome 2 (2R42A16 -18) is the most common chromosome in Chinese. RNA synthesis,in situ hybridization, in the development of PLD at the beginning of development, in the middle of development, in the early stages of blastoderm, in the development of PLD at the beginning of function enzymes. 3. The fat content of the lipid is reduced to 1- 4%, and the lipid content of the lipid is reduced to 1 - 4%. Recently, we have refined the enzyme to 60K and found that the enzyme has the function of 2-position shift of 2-position shift of