ホスホリパーゼDを介する細胞増殖シグナリング

通过磷脂酶 D 传递细胞增殖信号

基本信息

批准号：
07273210
负责人：
山下哲
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ホスホリパーゼDは受容体刺激により活性化され,ホスファチジルコリンを分解してホスファチジン酸やジアシルグリセロール,リゾホスファチジン酸生成を引き起こす重要な酵素である。この酵素は不飽和脂肪酸で活性化されるタイプと低分子Gタンパク質(ARF, Rho)で活性化されるタイプの2種類に大別される.我々ははじめて不飽和脂肪酸活性化酵素(分子量190K)をブタ肺ミクロソームから精製することに成功したが,本研究はその発展としてこれら二つのタイプのホスホリパーゼDのcDNAクローニングを行った.脂肪酸活性化酵素については精製酵素の部分アミノ酸配列を決定し,一致するヒト配列をデータベースのなかに見出した.分子量も精製酵素のそれに一致したので,cDNAの供与を受け発現を試みている.また酵母(S. cerevisiae, Sch. pombe)のARF活性化型酵素,ヒトのARF活性化型酵素PLD1,植物(ヒマ)の酵素のコンセンサス配列を用いてPCRを行いラット脳cDNAライブラリーから新しいcDNAクローンを得た.配列がヒトPLD1の配列と異なるので新しい低分子Gタンパク質活性化型酵素と思われる.現在までにホスホリパーゼDの活性化に関係すると報告された低分子Gタンパク質はARF, Rho, Ralであるので,得られた配列を大腸菌,動物細胞で発現させ活性化に必要なGタンパク質を同定したい.またホスホリパーゼDをブタ大腸粘膜のミクロソームから精製している過程で,阻害因子の存在が示されたので精製を行った.阻害因子を大腸粘膜のミクロソームからコール酸で可溶化され,イオン交換,キレートカラム,ゲル濾過,HPLCを用いてほぼ均一にまで精製した.このタンパク質はホスホリパーゼDの調節機構を考える上で重要と思われ,また臨床的な応用も考えられるのでクローニングを行い構造と機能を明らかにする予定である.

磷脂酶D是一种重要的酶，被受体刺激激活并分解磷脂酰胆碱，并引起磷脂酸，二酰基甘油和溶物磷脂酸的产生。该酶可以广泛分为两种类型：一种被不饱和脂肪酸激活的一种，一种被小型G蛋白（ARF，RHO）激活。我们首次成功纯化了猪肺微粒体的非饱和脂肪酸激活酶（分子量：190K），并且由于这项研究，我们已经克隆了这两种类型的磷脂酶D的cDNA。用于脂肪酸激活酶的脂肪酸激活酶，我们确定了纯化的人类两个人类酸酯序列，并确定了纯化的Enzyme序列，并确定了该数据序列的序列。由于分子量也与纯化的酶相匹配，因此我们在接受cDNA捐赠后试图表达它。此外，使用酵母（S. cerevisiae，sch。pcr）使用pombe的ARF激活酶的共识序列，人类ARF激活的酶PLD1和植物（HOMA）酶进行，以及新的cDNA clone与新的cDNA clone与Rat brain cdna图书馆不同。酶。迄今为止，据报道与磷脂酶D的激活有关的小G蛋白是ARF，Rho，并且由于它是RAL，我们希望在Escherichia Coli和Animal细胞中获得的序列，以识别出液化菌群的por液素的过程。显示的是，将抑制剂从结肠粘膜的微粒体中溶解，并使用离子交换，螯合物柱，凝胶过滤和HPLC纯化至几乎均匀的。