脳におけるホスホリパーゼDの発現と活性調節

脑内磷脂酶D的表达及活性调节

• 批准号: 09259205
• 负责人: 山下 哲
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09259205/
• 关键词: ホスホリパ-ぜD; 神経情報伝達; PLD1; PLD2; ホスファチジルイノシトールビスリン酸; 低分子Gタンパク質; 組織分布

本年度は脳で発現しているホスホリパーゼDのクローニングを行った.酵母,ヒマPLDやヒトPLD1のコンセンサス配列を用いてPCRを行いラット脳,肝臓から計3種のPLDをクローニングし,配列を決定したのち分裂酵母で発現させPLD活性を有することを検証した.一つはヒトで報告されているhPLD1と同じものであったのでrPLD1aと命名した.他の一つはそのスプライスバリアントで38アミノ酸を欠損するものであったのでrPLD1bと命名した.3番目の脳からクローニングされたものは新規の酵素で,PLD1が低分子Gタンパク質,PIP_2にのみ依存したのででrPLD2と命名した.以上により,ホスホリパーゼDはPLD1,PLD2,およびその存在がよく知られている脂肪酸依存性PLDに大別されることが明らかになった.RT-PCRによりPLDの組織分布を調べたところ,脳に存在するPLD1はb型が主で、a型はほとんど検出されないことが判明した.PLD2は脳に強く発現していた.また脂肪酸依存性酵素を精製する過程で酵素を強く阻害する因子が存在することを見出したので精製,同定を行い,それらがリゾホスファチジルセリン,ホスファチジルイノシトール,リゾホスファチジルイノシトールであることを明らかにした.これらのリン脂質は脳に存在するすべてのタイプのPLDをきわめて低濃度で阻害した.

This year, the company has launched a series of new projects. Yeast, yeast, PLD1 gene sequence determination by PCR and sequencing of three kinds of PLD gene sequence determination by PCR. A RPLD1b is a new enzyme that has been named for its low molecular weight protein, RPLD1 is a low molecular weight protein, RPLD2 is a low molecular weight protein, and RPLD2 is a high molecular weight protein. The presence of PLD1, PLD2, PLD2, PLD3, PLD4, PLD5, PLD6, PLD7, PLD7, PLD8, PLD8, PLD9, PLD9, PLD9 Fatty acid-dependent enzyme purification process, enzyme strong inhibition factors exist, and the purification process, the same process. The presence of PLDs in the presence of these lipids is a barrier to low concentrations.

项目成果

Katayama,K.et al.: "Cloning,differenticl regulation as tissue distribution of alternatiely splied isoforme of ARF-dependent phoipb-ol. pass D from ret liver" Biochem.J. 329. 647-652 (1998)

Katayama，K.et al.：“克隆，差异调节作为 ARF 依赖性 phoipb-ol 的交替剪接亚型的组织分布。来自 ret 肝脏的 D 传递”Biochem.J。

Yamashita,S.et al.: "Phosphatidylinositol from yeast" Biochim.Biophys.Acta. 1348. 173-178 (1997)

Yamashita,S.et al.：“来自酵母的磷脂酰肌醇”Biochim.Biophys.Acta。

Uchida,N.et al.: "Increased phospholipase D activity in human breast cancer" J.Cancer Res,Clin,Oncol.123. 280-285 (1997)

Uchida,N.et al.：“人类乳腺癌中磷脂酶 D 活性增加”J.Cancer Res,Clin,Oncol.123。

Yamashita,S.et al.: "Phosphatidyl serine Synthase from yeast" Biochim.Biophys.Acta. 1348. 228-235 (1997)

Yamashita，S.et al.：“来自酵母的磷脂酰丝氨酸合酶”Biochim.Biophys.Acta。

Yamashita,S.et al.: "Choline Kinase from yeast" Biochim.Biophys.Acta. 1348. 63-69 (1997)

Yamashita,S.et al.：“来自酵母的胆碱激酶”Biochim.Biophys.Acta。