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ヌクレオチド除去修復機構におけるユビキチン蛋白分解系の役割

泛素蛋白水解系统在核苷酸切除修复机制中的作用

基本信息

批准号：
10163245
负责人：
菅澤薫
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

出芽酵母RAD23のヒト・ホモローグであるhHR23B蛋白質は、ヌクレオチド除去修復(NER)においてDNA損傷の認識に関わるXPC蛋白質と強固な複合体を形成する。我々は、酵母two-hybrid screeningにより、26Sプロテアソーム・サブユニットの一つ、S5aが.hHR23B、およびもう一つRAD23ホモローグであるhHR23Aと相互作用することを見出している。組換え蛋白質の欠失変異体を用いたbinding assayにより、hHR23BではN末端のユビキチン相同配列、S5aの側ではマルチュビキチン鎖結合部位として同定されたC末端に近い領域が、この相互作用に必要であることがわかった。さらに、細胞抽出液を用いたグリセロール密度勾配遠心、およびプロテアソーム・サブユニットに対する抗体を用いた免疫共沈降実験から、細胞内においてもhHR23Bの少なくとも一部はプロテアソームに結合していることが示唆された。一方、二つのRAD23ホモローグのそれぞれについて、ノックアウトマウスを作成レた。mHR23A欠損マウスは外見上まったく正常であったが、mHR23B欠損マウスはメンデル則からの期待値の1/10程度の頻度でしか得られず、また個体サイズも野生型と比較して明らかに小さい。しかしながら、このマウスから単離したmHR23B欠損細胞のNER能は野生型と同様であった。このことは、NERに関しては二つのRAD23ホモローグ間に機能的互換性があること、また823Bは個体の発生、成長過程において、NER獣外の何らかの重要な機能を果たしていることを示している。

The budding yeast RAD23 protein is responsible for the formation of the XPC protein and the robust complex in the recognition of DNA damage. I, yeast two-hybrid screening, 26S, HHR23B, RAD23, HHR23A and interaction. The binding assay for protein deletion, hHR23B, N-terminal and S5a is identical. The binding site for protein deletion, C-terminal and C-terminal is identical. In addition, the cell extract was used for the concentration of hHR23B in the central, central, and central regions. One side, two side RAD23 mHR23A is short of damage, but the frequency of damage is 1/10th of the expected value. MHR 23B is a defective cell and can be used as a wild type. The interchangeability of functions between RAD23 and RAD23 is shown in the development and growth process of individuals.