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突然変異に対する防御機構としてのDNA損傷認識機構の解明

阐明 DNA 损伤识别机制作为针对突变的防御机制

基本信息

批准号：
12213147
负责人：
菅澤薫
金额：
$ 2.88万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213147/
关键词：
ヌクレオチド除去修復色素性乾皮症 XPC-HR23B複合体 DNA損傷認識機構 DDB因子

项目摘要

哺乳類のゲノム全体で働くヌクレオチド除去修復(NER)副経路において、DNA損傷認識因子として機能するXPC-HR23B複合体のDNAに対する結合特異性の詳細な解析を行なった。特定のDNA損傷や構造を部位特異的に含むDNA断片を用いてゲルシフト法やフットプリント法を行なうことにより、数個の非対合塩基(いわゆるバブル構造)があれば特に損傷が存在しなくてもXPC-HR23Bがこれを認識して結合できることが示された。すなわち、XPC-HR23BはDNA損傷そのものではなく、損傷によって誘起されるDNA構造の歪みを認識して結合すると考えられる。一方、これらのDNA基質を用いて無細胞NER反応を行なったところ、NER機構によるオリゴヌクレオチドの切り出しにはXPC-HR23Bの結合のみでは不十分で、バブル構造中に実際に損傷塩基が存在することが必要であった。以上の結果から、NERにおける損傷認識は(1)XPC-HR23BによるDNAの構造異常の認識、および(2)それに続く損傷塩基の確認、という少なくとも2段階の機構で行われていることが示された。さらに、XPC-HR23Bと相互作用する因子を探索する目的で、XPC蛋白質をbaitとして酵母2ハイブリッド法によるスクリーニングを行ない、複数のポジティブクローンを得た。現在、これらの因子とXPC-HR23Bとの相互作用の意義について、解析を進めている。さらに、XPCや別の損傷結合因子として知られるDDB因子のサブユニットにFLAGタグを融合したものを過剰発現する細胞株の単離を進めており、これを用いて相互作用する因子の解析を今後行なう予定である。

Mammalian のゲノムall で働くヌクレオチド removal repair (NER) deputy 経路において, DNA damage recognition factor Detailed analysis of the binding specificity of the XPC-HR23B complex and its binding specificity. Specific DNA damage structures, site-specific DNA fragments, and multiple non-containing DNA fragments.合婩 basis(いわゆるバブルstructure)があれば特にdamageがexistentしなくてもXPC-HR23B is designed to meet the needs of both parties.すなわち, One side, DNA matrix いて cell-free NER reaction を line なったところ, NER organization によるオリゴヌクレオチドのcut りThe combination of XPC-HR23B and XPC-HR23B is not perfect, and the existence of damaged base in the structure of the structure is necessary. The results of the above are as follows: NER damage recognition (1) XPC-HR23B DNA structural abnormality recognition,および (2) それに続く Damage to the base のconfirmation, という小なくとも2-stage institution で行われていることがshow された.さらに、XPC-HR23B とInteraction するFactor をExploration するObject で、XPC protein をbaitとして yeast 2ハイブリッド法によるスクリーニングを行ない, plural のポジティブクローンを得た. Now, the meaning of the interaction between XPC-HR23B and XPC-HR23B is analyzed.さらに, The analysis of the current cell lines and the analysis of the interaction factors will be carried out in the future.