权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

C群色素性乾皮症(XPC)蛋白質の構造と機能

C 族着色性干皮病 (XPC) 蛋白的结构和功能

基本信息

批准号：
10780432
负责人：
菅澤薫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10780432/
关键词：
XPC蛋白質ヌクレオチド除去修復核移行配列 XPC TFIIH

项目摘要

前年度までの組換え蛋白質を用いた無細胞系での実験から、C末端の125個のアミノ酸を欠失した変異XPC蛋白質は基本転写因子TFIIHとの相互作用に欠損が見られ、また無細胞ヌクレオチド除去修復反応においても不活性であることが明らかになった。そこで、この変異XPC蛋白質の細胞内での機能を解析する目的で、XP-C群細胞に変異遺伝子を導入して形質転換細胞株を樹立した。間接蛍光抗体染色により、上記のC末端欠失体、およびN末端の117個のアミノ酸を欠いた変異XPCはいずれも正常に核に移行できることを確認した。しかしながら、N末端欠失XPCを発現する細胞で紫外線抵抗性の回復が見られたのと対照的に、C末端欠失XPCを発現する細胞は親株のXPC欠損細胞と同等の紫外線感受性を示した。すなわち、無細胞系の結果と一致して、C末端部分はXPC蛋白質のヌクレオチド除去修復活性の発揮に必須であることが明らかになった。現在、C末端部分についてさらに細かい欠失変異体を作成しており、今後その構造機能相関を解析していく予定である。また、種々の変異XPC蛋白質を一過性に過剰発現して間接蛍光抗体染色を行なうことにより、XPC蛋白質の核移行に関わる配列をN末端付近に2ケ所同定した。XPC蛋白質の活性が翻訳後修飾によって制御されている可能性を調べるため、まずXP-C群細胞にHA、またはFLAGタグを付加したXPC蛋白質のcDNAを導入して形質転換細胞株を単離した。これらの細胞株が正常細胞と同レベルのXPC蛋白質を発現していること、また紫外線抵抗性の回復からタグをつけたXPCが正常な機能を発揮できることを確認した。さらに、FLAGタグが特異的な免疫沈降に非常に有効であることを確かめたので、今後紫外線照射前後でのリン酸化の変動等を解析していく予定である。

In the previous year, we used cell-free cell lines, C-terminal amino acid, XPC protein, TFIIH protein interaction, TFIIH protein interaction, cell cycle, and so on. The purpose of this study was to analyze the molecular weight of XPC protein, and the cells of XP-C group were transferred into the cell line of E. coli. After phosphorescence antibody staining, the C-terminal deletion was detected, and the N-terminal was confirmed by Elisa. The normal nuclei were transferred to normal nuclei of XPC mice. The loss of XPC in the N-terminal, the UV-resistance of the cell in the N-terminal, and the loss of XPC in the C-terminal showed that the cell line XPC was not sensitive to the same UV sensitivity. The results showed that the results were consistent with each other, and the C-terminal part of the cell line had the same results. In order to remove the active XPC protein, it was necessary to correct the DNA sequence. At present, some of the missing parts of the C-terminal system are made into a system, and the future machine will be able to analyze the predetermined data. All kinds of XPC protein transients were detected by photoluminescence antibody staining, and the N-terminal of XPC protein was detected by fluorescence antibody staining, and the N-terminal of DNA protein was detected by Elisa. After the XPC protein activity was flipped, it was modified to control the possibility that the cell line was isolated from the cell line. The cell line was isolated from the cell line, which was isolated from the cell line. The cell line was isolated from the cell line. The normal cell line was the same as that of the normal cell line. The XPC protein was detected in the same cell line. The UV line resistance was detected. The normal XPC cell line was confirmed by the normal cell line. The immunoprecipitation of anti-virus and FLAG-induced immune response is very important, such as the determination of immune response, the detection of acidification before and after UV irradiation, and so on.