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ゲノム損傷認識に関わるXPCタンパク質のリン酸化による機能調節

XPC 蛋白磷酸化参与基因组损伤识别的功能调节

基本信息

批准号：
08F08449
负责人：
菅澤薫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08F08449/
关键词：
ヌクレオチド除去修復 XPC リン酸化カゼインキナーゼ2

项目摘要

哺乳類のゲノム全体で働くヌクレオチド除去修復(NER)において,損傷認識因子として必須であるC群色素性乾皮症(XPC)タンパク質が、試験管内でカゼインキナーゼ2(CK2)によりリン酸化され得ることを昨年度までに明らかにした。CK2は細胞の生育に必須であり、タンパク質のリン酸化を介してDNA修復、細胞死、その他のシグナル伝達経路に関わることが知られている。従って細胞内においてXPCが実際にCK2によるリン酸化の標的になるのであれば、この修飾の意義を明らかにすることはNER反応における損傷認識機構の制御を理解する上で重要であると考えられた。そこでまず、細胞内のCK2の活性をRNA干渉法や阻害剤(TBB)を用いて抑制した。CK2の触媒サブユニットに対するsiRNAをヒト細胞株に導入して72時間後におけるCK2の発現をウェスタンブロットで検討したところ、CK2のタンパク質量が90%以上減少していることがわかった。そして、これらの細胞ではXPCの883,884番目のセリン残基(S883/884)のリン酸化レベルも低下していた。またTBBを細胞に処理した場合にも、濃度依存的にS883/884のリン酸化の減少が見られた。これらの結果から細胞内においてもXPCのS883/884がCK2によりリン酸化される可能性が示唆された。一方、XPCのリン酸化が持つ生理的な意義を明らかにするため、S883/884を同時にアラニン(SASA)やアスパラギン酸(SDSD)に置換した変異体を安定に発現する細胞株を作成し、紫外線損傷に対する感受性を比較検討した。その結果、XPCのSASA変異体は野生型と同様な生存率を示すのに対して、SDSD変異体は生存率が若干低下することがわかった。以上の結果から、細胞内においてCK2によるXPCのリン酸化が何らかの機能制御に関わっていることが示唆された。

For all mammalian animals, in addition to the treatment of NER, it is necessary to correct the symptoms of group C pigmented xeroderma (XPC). In the tube, there is a significant increase in acidification of pigmented xeroderma pigmentosum (XPC). It is necessary for a CK2 to have a baby, to have a baby, to be acidified, to repair a DNA, to die, to have a baby, and to know how to do it. On the basis of the results of the XPC analysis, the XPC information system is used to determine the significance of the acidifications. the meaning of the correction is that the meaning of the NER is that the system is responsible for the understanding of the important information on the system. The activity of intracellular CK2, the activity of RNA dry assay, the inhibition of TBB, the activity of intracellular DNA and the activity of intracellular DNA were detected. When the cell strain of the CK2 catalyst was incubated in the first two days of incubation, the cell line of the siRNA cell line was incubated for 72 hours. After the cell line was incubated for 72 hours, the CK2 showed that the temperature of the cell line was higher than that of the control group, and that of the CK2 cell strain was more than 90%. The cells were XPC 883884 and the residue (S883 Uniqpt884) was acidified. TBB