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原子間力顕微鏡を用いた転写因子/DNA相互作用の解析

使用原子力显微镜分析转录因子/DNA 相互作用

基本信息

批准号：
10173215
负责人：
竹安邦夫
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、解像力数Å-数nmの原子間力顕微鏡(Atomic Fource Microscopy:,AFM)を用いて以下結果を得た。1. 約2万塩基対からなるβグロビン遺伝子のエンハンサー領域(Locus Control Region(LCR))において、調節タンパク質Bach1/MafK複合体は塩基配列により予想される複数の結合部位にそれぞれ同時に結合し三重DNAループを形成すること、そのためには、Bach1分子中のタンパク質会合領域(BTBドメイン)が必要であることを示した(投稿中)。2. 数千塩基対からなるDNAとコアヒストン(ヒストンH2A、H2B、H3およびH4各2)とからヌクレオソームを再構成し、1つのヌクレオソームあたり146塩基対のDNAが取り込まれることを定量的可視化により示した。また、Xenopus 5S RNA遺伝子とコアヒストンとからヌクレオソームを再構成すると、ヌクレオソームが5S RNA遺伝子のポジショニング配列に相当する部位に形成されること、さらに、この系にヒストンHlを加えるとヌクレオソーム上のDNAの巻きかたが更にtightになることを示した(Sato et al,1999)。3. DNAトポイソメラーゼIIは会合して二量体になると、会合面がDNAを通す穴を形成すること(Nettikadan et al.,1998)、AFMとストップドフロ一法との併用でDNAヘリカーゼのらせん巻き戻し過程が可視化できること(投稿準備中)、また、AFMの探針にカーボンナノチューブ(先端経5nm)を使用することにより解像力が数倍から10倍上昇することを示した(Akita et al.,1999;Nishijima et al.,1999)。近年、“DNAから染色体へ"の間をつなぐものとして「ヌクレオソームのポジショニング」といったヌクレオソームレベルの事象が注目を集めている。このクロマチンレベルでの転写機構解明に向けて、分子生物学的手法(ヌクレオソーム再構成)と構造生物学的手法(AFM)との組み合わせは強力なアプローチとなると期待される。

In this study, Atomic source microscopy (AFM) was used to obtain the following results. 1. About 20,000 base pairs of β-linked DNA fragments are located in the Locus Control Region(LCR), which regulates the binding of BTB molecules in the Bach1/MafK complex. 2. A quantitative visualization of DNA from thousands of base pairs (H2A, H2B, H3 and H4 2 each) is presented. The Xenopus 5S RNA gene is reconstructed from the 5S RNA gene and the 5S RNA gene is arranged in a sequence corresponding to the position of the 5S RNA gene (Sato et al,1999). 3. DNA fusion II (Nettikadan et al., 1998)AFM, AFM. 1999;Nishijima et al., 1999)。In recent years, the "DNA dye" has become increasingly popular among the public. The molecular biology method (AFM) and the structural biology method (AFM) are used to analyze the mechanism of molecular biology.