転写因子IRF-3による細胞生理機能の制御

转录因子IRF-3对细胞生理功能的控制

基本信息

批准号：
10173233
负责人：
藤田尚志
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ウイルス感染が起きた細胞内では、はじめにIFN遺伝子を含む種々の遺伝子の発現が誘導され、抗ウイルス作用などの生体防御機構が働くことになる。我々はこの一連性化機構のうちIRF-3が最初に活性化される転写因子である事を明らかにした。IRF-3はほとんど全ての細胞に比較的大量に発現されでいるが、その分子内に在在するNuclear ExportSignal(NES)の機能により細胞質に局在しており、しかも転写因子としての機能を持たない不活性型である。しかしながら、ウイルスあるいは二重鎖RNA刺激にによってC端側に存在する特定セリン残基がリン酸化されることにより核内に移行し、核内に存在するp300/CBPと複合体を形成すると共にDNA結合能を獲得することにより活性型に変換する。その結果、上記の遺伝子活性化が引き起こされる。本年度はこの活性化の最も重要な鍵を握ると考えられるIRF-3の燐酸化酵素の本質に迫ることを目的に解析を進めた。培養細胞株を二重鎖RNAによってある条件で処理するとアボトーシスが強く誘導されることを見い出した。この条件下ではIFN遺伝子の発現が強く誘導されている。大量の細胞をこの条件で処理することにより選別し、細胞死に耐性のクローンを多数得ることができた。これらに対して二重鎖RNAによるIRF-3の燐酸化誘導能を検討したところ、幾つかのものはIRF-3の燐酸化が観察されなかった。しかしこれらの細胞ではNF-κBの誘導は親察されることから、単に二重鎖RNAの細胞への取り込みなどの段階での阻害ではないと考えられた。さらにこれらの細胞は、ウイルス感染等、様々なプロトコールで誘導をしてもIFN遺伝子が存在するにもかかわらず、IFNの産生がほとんどみられない事も明らかとなった。このような機能欠損細胞について、相補性の検討、cDNAライブラリーによる機能相補などにより、IRF-3燐酸化の分子機構を明らかにして行きたい。

在发生病毒感染的细胞中，最初诱导了包括IFN基因在内的各种基因的表达，并且抗病毒药作用等生物防御机制变得活跃。我们透露，IRF-3是这种序列化机制的第一个转录因子。尽管在几乎所有细胞中，IRF-3在相对较大的量中表达，但它通过存在分子中的核出口信号（NES）的功能在细胞质中定位，并且是一种不活跃的形式，它不起转录因子的作用。然而，存在于C端侧的特异性丝氨酸残基被病毒或双链RNA刺激磷酸化，然后转移到核中，形成一个核中存在的p300/cbp的复合物，并通过获得DNA结合能力将其转化为活性形式。这导致上述基因激活。今年，我们进行了分析，目的是实现IRF-3的磷酸酶的本质，这被认为是该激活的最重要关键。发现在某些条件下，具有双链RNA的培养细胞系的处理可强烈诱导无毒性。在这些条件下，强烈诱导IFN基因的表达。通过处理这些条件对大量细胞进行分类，并且可以获得大量对细胞死亡的克隆。当研究了双链RNA诱导IRF-3磷酸化的能力时，在其中一些中未观察到IRF-3的磷酸化。但是，由于NF-κB的诱导是这些细胞中的父母指示，因此认为这不仅是阶段的抑制作用，例如摄取双链RNA对细胞的摄取。此外，已经揭示了即使这些细胞是由病毒感染等各种方案诱导的，尽管存在IFN基因，但几乎不会观察到IFN的产生。我们想通过使用cDNA文库检查互补性和功能互补，阐明此类功能缺陷细胞中IRF-3磷酸化的分子机制。