多剤耐性HIV-1の出現機構

多重耐药HIV-1的出现机制

• 批准号: 10180227
• 负责人: 加藤 真吾
• 金额: $ 1.66万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10180227/
• 关键词: HIV-1; 薬剤耐性; 遺伝型; 血中薬剤濃度; 多剤併用療法; 血漿RNA; プロウイルス; 耐性検査

薬剤耐性HIV-1の出現は多剤併用療法失敗の主要な原因の一つとなっている。したがって、HIV-1の多剤耐性獲得の機構を明らかにすることは、抗HIV-1治療の成績を向上させるために重要な課題である。本研究では、血中薬剤濃度と薬剤耐性HIV-1出現との関連性について検討した。対象は、慶應義塾大学病院特殊感染症クリニックに外来受診中のHIV-1感染者2例(C5とC13)であった。HIV-1 env遺伝子V3領域を含む327塩基対の塩基配列を決定し、サブタイプAからHの参照配列を用いて系統樹分析を行った結果、C5のサブタイプはA、C13のサブタイプはBであった。C5はネルフィナビル、AZT.ddCの投与を受け、C13はネルフィナビル、MT、3TCの投与を受けた。治療開始前のCD4細胞数は、C5では138細胞/mlで治療開始後も漸減傾向であった。C13では505細胞/mlで治療開始後も同じく漸減傾向であった。治療開始前の血漿HIV-1 RNA濃度は、C5では2,800コピー/mlで、治療開始後17ヶ月まで検出限界以下であった(サブタイプAに特異的なプライマーを用いて測定した)。C13では60,000コピー/mlで、治療開始後一旦検出限界以下になったが、3ヶ月後から徐々に上昇し、6ヶ月後には10,000のオーダーになった。両症例の血中ネルフィナビル濃度をHPLCによって測定した結果、C5は投与4時間後で2000ng/ml、8時間後で832ng/ml、C13は投与12.5時間後で1240ng/mlであった。クリアランス率を考慮すると、C13の方がC5よりも、血中ネルフィナビル濃度が4倍程度高いと考えられる。C5とC13のそれぞれプロウイルスと血漿ビリオンのプロテアーゼコーディング領域をnested PCRで増幅し塩基配列を決定した結果、C5では治療開始後17ヶ月までネルフィナビル耐性を示すアミノ酸置換は検出されなかったが、C13では治療開始後7ヶ月からネルフィナビル耐性を示すD30Nのアミノ酸置換が検出された。すなわち、当初の予想とは反して、血中ネルフィナビル濃度の高いC13のHIV-1の方が先に薬剤耐性を獲得した。治療開始前の血漿HIV-1 RNA濃度はC13の方が高かったことが薬剤耐性HIV-1の出現とより関係している可能性がある。本研究の結果、薬剤耐性HIV-1出現の容易さは血中薬剤濃度だけでは必ずしも決まらず、HIV-1の複製能やサブタイプなどの様々な要因を考えなければならないことが示唆された。

耐药性HIV-1的出现是多药治疗失败的主要原因之一。因此，阐明HIV-1多药耐药性获取的机制是改善抗HIV-1治疗结果的重要问题。在这项研究中，我们研究了血液药物浓度与耐药HIV-1的发生之间的关系。这些受试者包括两例HIV-1感染（C5和C13），他们正在访问Keio University Hospital特殊传染病诊所的门诊诊所。确定了包含HIV-1 Env基因V3区域的327个基对的基本序列，并使用亚型A至H的参考序列进行系统发育分析。C5的亚型为A，C13的亚型C5的亚型为B。C5接收到Nerfinavir and azt.ddc，同时C13接收到了C13接收的Nerfinavir n n nererfinavir，并3 neRefinavir，并3.在治疗开始之前，CD4细胞的数量为138个细胞/mL，即使在治疗开始后，CD4细胞的数量仍会继续减少。 C13的趋势为505个细胞/mL，即使在治疗开始后，这种趋势也同样减慢了。治疗前的血浆HIV-1 RNA浓度为2,800副本/mL，低于检测极限，直到开始治疗后17个月（使用特定于亚型A的引物测量）。在C13中，温度为60,000份/毫升，在治疗开始后，极限低于检测限，但逐渐从3个月开始上升，6个月后达到10,000次。通过HPLC测量了两种病例的血液Nerfinavir浓度，给药4小时后C5为2000 ng/ml，8小时后832 ng/ml，施用12.5小时后C13为1240 ng/ml。考虑到清除率，人们认为C13的血液Nerfinavir浓度比C5高四倍。通过嵌套的PCR扩增了病毒和血浆病毒体C5和C13的蛋白酶编码区，并确定了碱基序列。在C5中，直到开始治疗后17个月才检测到表现甲状腺酸烯甲韦韦抗性的氨基酸取代，但是在C13中，从治疗后7个月开始检测到D30N的氨基酸取代，该氨基酸的取代（d30n）表现出了nerfinavir耐药性。换句话说，与最初的预测相反，HIV-1，C13在血液中具有高浓度的Nerfinavir，首次获得了耐药性。在开始治疗之前，较高的血浆HIV-1 RNA浓度可能与耐药HIV-1的出现有关。这项研究的结果表明，耐药性HIV-1的出现的易于性不一定由血液药物浓度决定，并且必须考虑各种因素，例如复制HIV-1的能力和亚型。

项目成果

加藤真吾: "HIVの薬剤感受性試験" 血液:免疫・腫瘍. 3(3). 67-73 (1998)

Shingo Kato：“HIV 药物敏感性测试”血液：免疫学/肿瘤 3(3) (1998)。

Negishi, M.et al.: "An HIV Autopy-Characterization of Zidovudine-resistant Subtype E HIV-1 from Autopsy Tissue Suggests the Route of Infection and an Alternative Therapy" Keio J.Med.48(1). 44-52 (1999)

Negishi, M.等人：“尸检组织中齐多夫定耐药 E 亚型 HIV-1 的 HIV 尸检表征表明感染途径和替代疗法”Keio J.Med.48(1)。

Kato, S.et al.: "A plaque hybridization assay for quantifying and cloning infections human immunodeficiency virus type 1 virions" J.Virol.Methods. 72(1). 1-7 (1998)

Kato, S.et al.：“用于定量和克隆人类免疫缺陷病毒 1 型病毒体感染的噬菌斑杂交测定”J.Virol.Methods。