HIV-1 プロウイルスの存在形態と活性化に関する研究

HIV-1原病毒的存在形式及激活研究

• 批准号: 11161229
• 负责人: 加藤 真吾
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11161229/
• 关键词: HIV-1; in vivo; PBMC; プロウイルス; 逆転写; RNA-DNA hybrid; competitive PCR; 抗レトロウイルス療法

ヒト体内におけるHIV-1の標的細胞のほとんどは休止期にある。休止期にある細胞はdNTP pool が小さいため、細胞内に侵入したHIV-1 RNAゲノムは逆転写の途中で止まった構造、すなわちRNA-DNA hybrid の状態で存在している可能性がある。しかし、RNA-DNA hybrid を定量することは非常に困難であるため、この問題に関する研究はあまり行われていない。そこで、本研究ではまず、HIV-1 RNA-DNA hybrid を迅速かつ正確に定量できる方法を開発し、その方法を用いて感染者の末梢血単核球(PBMC)中のHIV-1 RNA-DNA hybrid を定量し、HIV感染症の進行や抗レトロウイルス療法によってHIV-1 RNA-DNA hybrid のレベルがどのように変化するかを調べた。方法を簡単に述べると、感染者のPBMCから全DNAを精製し、制限酵素Mse Iで切断後、切れ残ったHIV-1 RNA-DNA hybrids をcompetitive nested PCR法によって定量した。この方法でRNA-DNA hybrid が選択的に検出できることは、HIV-1 dsDNA を用いた場合はHIV-1 DNA の増幅が見られないこと、またHIV-1 DNAの逆転写酵素産物をRnase Hで処理してからMse Iで切断した場合もまったくHIV-1 DNA の増幅が見られないことで証明した。この方法を用いて5例の感染者(そのうちの3例は抗レトロウイルス療法開始前後の2検体)におけるPBMC中のHIV-1 RNA-DNA hybridを定量した。その結果、抗レトロウイルス療法を行っていない場合、全HIV-1 DNA中のRNA-DNA hybrid の割合は18%から67%であった。この割合はCD4細胞数と相関がなかった。また、治療開始後、RNA-DNA hybrid のレベルが大きく低下していた。これらの結果から、in vivo におけるHIV-1感染は、in vitro における実験とは大きく異なり、逆転写の途中で止まっている状態がかなりの割合で存在することが分かった。また、HIV-1 RNA-DNA hybrid のレベルが血漿中の感染性ウイルスのレベルと関連があることが示唆された。すなわち、HIV-1 RNA-DNA hybrid の定量値はウイルスの活動を示す新しい指標となる可能性があると考えられる。

In the body, the cells of the HIV-1 disease are in a state of rest. During the rest period, there is a possibility that there is a possibility that dNTP pool cells invade HIV-1 RNA cells, that they reverse writing, that they are not built on the way, and that they are RNA-DNA hybrid. It is very difficult for RNA-DNA hybrid to make a quantitative analysis of the situation, and it is very difficult to make a study of the problem. Anti-HIV-1 RNA-DNA hybrid quantitative assay and HIV infection assay were performed in the peripheral blood of infected patients (PBMC). The anti-HIV-1 RNA-DNA hybrid assay was used to detect the infection of HIV-1 in the peripheral blood of infected persons (PBMC). The anti-HIV-1 antibody assay was used to detect HIV-1 infection. Methods the samples of PBMC-1 RNA-DNA hybrids and competitive nested PCR were used to determine the quantity of human immunodeficiency virus. In the RNA-DNA hybrid selected by the method, you can use the HIV-1 dsDNA to close the HIV-1 DNA. See the Rnase H, the Mse I cut, the Rnase H, the Mse I cut, the HIV-1 DNA, the frame, the enzyme, the enzyme, the enzyme. Methods HIV-1 RNA-DNA hybrid quantitative assay was used in 5 cases of HIV-1 infection (3 cases of HIV-1 infection in 3 cases) before and after the start of the anti-HIV-1 anti-HIV antibody test). Methods the quantitative detection of HIV-1 RNA-DNA hybrid in PBMC was carried out. The results showed that the anti-HIV-1 DNA method was effective, and the whole RNA-DNA hybrid was cut off by 18% and 67% respectively. Cut off the number of CD4 cells and compare each other. After the beginning of the treatment and treatment, RNA-DNA hybrid will have to pay attention to the low level of treatment. The results showed that in vivo infection caused HIV-1 infection, in vitro infection caused severe infection, and the reverse writing stopped on the way to check the status of the virus. Infection, infection. The information system, HIV-1 RNA-DNA hybrid quantitative information system, the activity indicator, the new information system, the possibility information system, the price, the

项目成果

Takizawa, Y.: "Electron microscopic DOPA reaction test for oculocutaneous albinism"Arch. Dermatol. Res.. (in press).

Takizawa, Y.：“眼皮肤白化病的电子显微镜多巴反应试验”Arch。

Oida, T.: "Role of gut cryptopatches in early extrathymic maturation of intestinal intraepithelia T cells"J. Immunol. (in press).

Oida, T.：“肠道隐斑在肠上皮内 T 细胞早期胸腺外成熟中的作用”J.