感染個体内におけるHIV-1プロウイルスの存在形態

HIV-1原病毒在感染者体内的存在形式

• 批准号: 12035224
• 负责人: 加藤 真吾
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12035224/
• 关键词: HIV-1; in vivo; PBMC; プロウイルス; 逆転写; RNA-DNA hybrid; competitive PCR; 抗レトロウイルス療法

ヒト体内におけるHIV-1の標的細胞のほとんどは休止期にある。休止期にある細胞はdNTP poolが小さいために、細胞内に侵入したHIV-1RNAゲノムは逆転写の中間体、すなわちRNA-DNA hybridの状態で存在している可能性が高い。我々は昨年度までの研究で、制限酵素Mse Iによる切断と定量的PCRを併用することによってこのhybridを定量する方法を確立した。本年度は、この方法によるhybridの定量値にHIV-1 ssDNAは含まれないことをまず明らかにし、次にこの方法を用いて、未刺激のPBMCと抗CD3抗体で刺激したPBMCにおけるhybrid形成の速度論を調べた。その結果、未刺激PBMCではhybridが感染1日後にピークを示しその後dsDNAに変化していったが、刺激PBMCでは感染2時間後にhybridが一時的に検出されるだけでdsDNAが主に産生されることが分かった。このことから、感染者のPBMC中のhybrid量は測定時から2、3日以前までに細胞に感染したウイルス量を反映していることが示唆された。次に、14人の長期未発症者を対象に、CD4の値に対するHIV-1 RNA、HIV-1DNA、HIV-1RNA/DNA hybridの各量の関係を、過去2年間における平均値をもとに調べた結果、RNA/DNA hybridのみがCD4値に対して統計的に有意な負の相関があることが分かった。さらに、HAART療法を受けている17人の感染者を対象に、HAART開始後のHIV-1 RNA/DNA hybrid量の変化を調べた。ほとんどの場合、HIV-1 RNA量の変化と平行の関係があったが、HIV-1 RNA量があまり下がらないのにCD4値が上昇した2例においてhybrid量が有意に減少していた。今後、HAARTの治療効果をみる指標としてHIV-1 RNA-DNA hybrid量が有効であるかどうかを統計的に証明する方法を検討する。また、hybridが主に存在するT細胞サブセットを調べることによって、in vivoにおけるHIV-1感染の主要な標的細胞群を明らかにしたい。

HIV-1 target cells in the body are isolated from resting cells. There is a high probability that the DNA pool will be small and that the virus will be able to invade the cell during the resting period. In our previous research, we established a quantitative PCR method for limiting enzyme Mse I. This year, the quantitative value of the hybrid in this method was adjusted to include HIV-1 ssDNA, unstimulated PBMCs, anti-CD3 antibodies, and the rate of hybrid formation in PBMCs. Results: 1 day after infection of unstimulated PBMCs, dsDNA was produced. 2 days after infection of stimulated PBMCs, dsDNA was produced. The amount of hybrid in PBMC of infected persons was measured before 2 or 3 days. The relationship between HIV-1 RNA, HIV-1 DNA and HIV-1RNA/DNA hybrid in 14 long-term undiagnosed patients, CD4 values, average values over the past 2 years, and statistical negative correlations between RNA/DNA hybrid values and CD4 values. Currently, 17 of the infected individuals who received HAART therapy were targeted, and changes in HIV-1 RNA/DNA hybrid levels were observed after HAART initiation. In two cases, the change and parallel relationship between HIV-1 RNA levels were observed, HIV-1 RNA levels fell and CD4 values increased, and the amount of hybrid was intentionally reduced. In the future, HAART treatment effectiveness indicators and HIV-1 RNA-DNA hybrid quantity have been discussed. The main target cell population for HIV-1 infection is the presence of T cells in vivo.

项目成果

Nishimura,N.: "Direct PCR from whole blood without DNA isolation."Ann.Clin.Biochem.. 37. 674-80 (2000)

Nishimura,N.：“无需 DNA 分离即可直接从全血进行 PCR。”Ann.Clin.Biochem.. 37. 674-80 (2000)

Takizawa,Y.: "Electron microscopic DOPA reaction test for oculocutaneous albinism."Arch.Dermatol.Res.. 292. 301-5 (2000)

Takizawa,Y.：“眼皮肤白化病的电子显微镜多巴反应试验。”Arch.Dermatol.Res.. 292. 301-5 (2000)

Hanabusa,H.: "An evaluation of semen processing methods for eliminating HIV-1."AIDS. 14(11). 1611-6 (2000)

Hanabusa,H.：“对消除 HIV-1 的精液处理方法的评估。”艾滋病。

Miyama,J.: "Condition of HIV-1-infected long-term non-progressors in Japan."The Journal of AIDS Research. 2(2). 89-95 (2000)

Miyama, J.：“日本 HIV-1 感染长期无进展者的状况。”艾滋病研究杂志。

Oida,T.: "Role of gut cryptopatches in early extrathymic maturation of intestinal intraepithelial T cells."J.Immunol.. 164(7). 3616-26 (2000)

Oida,T.：“肠道隐斑在肠上皮内 T 细胞的早期胸腺外成熟中的作用。”J.Immunol.. 164(7)。