感染個体内におけるHIV-1逆転写中間体に関する研究

感染者体内HIV-1逆转录中间体的研究

• 批准号: 13015222
• 负责人: 加藤 真吾
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13015222/
• 关键词: HIV-1; 逆転写; RNA-DNAハイブリッド; PBMC; PCR; 単球; マクロファージ; メモリーT細胞; ナイーブT細胞

昨年度までの研究において、HIV-1の逆転写中間体であるRNA-DNAハイブリッドが感染者の末梢血単核球(PBMC)中に存在することを明らかにした。本年度は、このハイブリッドの量がウイルスの活動性とどのような関係があるかを検討するとともに、PBMC中のどの細胞群に主に存在しているのかを調べた。HIV-1 RNA-DNAハイブリッドの定量は、感染者PBMC由来DNAを制限酵素Mse Iで消化した後、competitive nested PCR法によって行った。ウイルス分離は、感染者と健常者のCD8陽性T細胞除去PBMCを混合し、抗CD3抗体による刺激後7日間培養することによって行った。細胞群の分離は、各種の細胞表面マーカーに対する抗体が結合したDynabeads M-450を用いて行った。26症例について検討を行った結果、ウイルス分離の成否に対して最も高い相関を示したのはハイブリッド量で(P=0.002)、次に血漿HIV-1 RNA量であった(P=0.073)。プロウイルス量とはほとんど相関がなかった(P=0.1)。プロウイルスは主に非活性化CD4細胞群に存在していた。一方、ハイブリッドは、活性化CD4細胞群と非活性化メモリーCD4細胞群に存在していたが、単球/マクロファージ群や非活性化ナイーブ細胞群では検出されなかった。以上の結果から、ハイブリッドの量は、感染個体内における感染性HIV-1の量的指標となることが示唆された。また、細胞に感染した後のHIV-1の動態が、細胞群によって大きく異なっていることがわかった。この差異が臨床経過とどのような関連があるのかを研究することが重要であると考えられる。

直到去年的研究表明，RNA-DNA杂种（HIV-1的逆转录中间体）存在于受感染者的外周血单核细胞（PBMC）中。今年，我们研究了该杂种的量与病毒活性如何相关，并检查了主要存在的PBMC中哪些细胞组。通过从受限制酶I的感染PBMC中消化DNA，然后使用竞争性的嵌套PCR方法来进行HIV-1 RNA-DNA杂交体的定量。通过将受感染和健康个体的CD8阳性T细胞耗尽的PBMC混合并在用抗CD3抗体刺激后7天进行病毒分离。使用Dynabeads M-450分离细胞组，该dynabeads与针对各种细胞表面标记的抗体结合。在检查了26例病例之后，病毒分离的成功或失败之间的最高相关性是杂化量（P = 0.002），其次是血浆HIV-1 RNA量（P = 0.073）。与病毒载荷几乎没有相关性（p = 0.1）。该病毒主要存在于灭活的CD4细胞群中。另一方面，激活的CD4和非活性记忆CD4细胞中存在杂种，但在单核细胞/巨噬细胞组或不活跃的幼稚细胞组中未检测到。以上结果表明，杂种的量是感染个体感染性HIV-1的定量指标。还发现细胞组之间细胞感染后HIV-1的动力学显着不同。认为研究这种差异与临床过程的关系很重要。