ジーントラップ法による新しい造血関連遺伝子の同定

利用基因陷阱法鉴定新的造血相关基因

• 批准号: 10181220
• 负责人: 中熊 秀喜
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10181220/
• 关键词: 造血関連遺伝子; ジーントラップ; 巨核球

ジーントラップ法を応用し、造血現象に関わる新規遺伝子の同定、発現や機能の解析を試みた。まず、ジーントラップベクターを導入したマウス胚幹細胞(ES細胞)とOP9ストローマ細胞を用いた培養系で造血発生を再現し、造血関連遺伝子と融合したレポーター遺伝子を発現する4個のESクローンを得た。このうち2個のクローン(12G10,4H5)より作成したヘテロマウスでは胎児肝や骨髄などにレポーター遺伝子の発現を認め、OP9ストローマ細胞を用いたin vitro実験結果を支持した。またコロニー解析ではCFU-mixや巨核球などにレポーターの発現が確認された。これら2個の遺伝子の塩基配列を決定したところ、4H5はC2H2タイプのzinc fingerコンセンサスをコードし、12G10は全く未知の遺伝子であった。続いてこの2つの遺伝子の生理機能を知る目的でヘテロマウスの掛け合わせによってホモマウスを作成した。これらのマウスは正常に生まれ発育しwi1d typeと比べ血液学的にも表現型に顕著な違いはなかった。一方、ヒトの血液株細胞にはこれらマウスで得られたcDNAプローブで検出されるRNAが存在していた。たとえば、マウスの巨核球に強く発現する4H5は、ヒト巨核球系の株細胞にも強く発現しており、種を超えて機能していることを示唆していた。現在、4H5のヒトホモログをクローン化し、ゲノム上の位置を解析中である。

The ジーントラップ法を応用し, the hematopoietic phenomenon に关わる新杝子の同定, the 発现や Function のanalytic をtrialみた.まず, ジーントラップベクターを introduced したマウス embryonic stem cells (ES cells) and とOP9 ストローマ cells were cultured with いたIt is a reappearance of hematopoietic disease and a fusion of hematopoietic related legacy and fusion.このうち2 pieces of のクローン(12G10,4H5)よりしたヘテロマウスでは煐Liver and bones, OP9 cells, and cells. The results of vitro実験をsupportした.またコロニーANALYSISではCFU-mixや Meganuclear ballなどにレポーターの発appearがconfirmationされた.これら2の伝子の婩组组をdeterminationしたところ、4H5はC2H2タイプのzinc fingerコンセンサスをコードし、12G10は全くUnknownの缝子であった.続いてこの2つの缝子のphysiological functionを知るpurposeでヘテロマウスのhangけ合わせによってホモマウスを成した.これらのマウスはNormal に生まれ発生しwi1d typeと than べHematological にもphenotype に顕出なviolation いはなかった. On the one hand, the blood strain cells of the ヒトはこれらマウスでget the cDNA and the プローブで検出されるRNAが exist and していた.たとえば, マウスの Meganuclear ball にstrong 発 appear する4H5は, ヒト Meganuclear ball system の strain The cell strength is strong and the function is strong, and the super function is super functional. Now, 4H5 のヒトホモログをクローン化し, ゲノム上のpositionをanalyzingである.