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発作性夜間血色素尿症(PNH)クローンの腫瘍性増殖機構の解析

阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）克隆的肿瘤生长机制分析

基本信息

批准号：
08265251
负责人：
中熊秀喜
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

発作性夜間血色素尿症(PNH)の多彩な病態のうち溶血以外の発生機序は依然不明である。後天性幹細胞変異、クローン性増殖、正常造血抑制や白血病発生などPNHクローンは血液がんの特徴を有する。そこで、最近我々はSCIDマウスを用いてPNHクローンの内因性増殖異常に起因する造血優位を実証した。続いて本研究において、この増殖異常を分子レベルで解析するための一手段として、正常とPNH細胞間で発現差を認める遺伝子をスクリーニングし、この増殖異常関連遺伝子の単離を試みた。PNHでは造血不全のため異常血球の量的確保が困難で、まずPNHおよび健常人より培養T細胞株を樹立した。この培養細胞よりRNAを回収しcDNAを調整し、oligo-dTプライマーおよび任意プライマーを用いPCR増幅してシークエンスゲル上で比較し、差を認める61個のcDNAバンドを検出した。これらを回収して同プライマーにて再度PCR増幅し、これをプローブとする確認用ノーザン解析を行ない3個を選択した。遺伝子断片をプラスミドに入れて増幅し塩基配列を決定したところ3'末端を含む128bpの未知の遺伝子断片1個が含まれていた。この遺伝子断片はヒト胎盤や血液細胞からランダムクローニングされたおよそ500bpの遺伝子の一部配列と95%以上のホモロジーを認めたが、いずれも構造的詳細や機能は不明であった。この遺伝子断片をプローブとしたノーザン解析ではPNH細胞にのみ約700bpのmRNAを検出した。現在、複数のPNH例の新鮮分離細胞および白血病細胞を用いて発現を確認する一方、PNH細胞cDNAライブラリーを調整して全塩基配列決定を進めている。

The development of progressive nocturnal hemoglobinuria (PNH) is still unclear except for its polychromatic pathologies and hemolysis. Acquired stem cell differentiation, normal hematopoiesis, leukemia development, PNH, and blood characteristics Recently, we have demonstrated that the cause of endogenous growth abnormalities in PNH is related to the development of hematopoietic cells. In this study, a method for molecular analysis of genetic abnormalities was developed to identify genetic differences between normal and PNH cells. It is difficult to ensure the amount of abnormal blood cells in PNH, but it is difficult to establish T cell lines in culture. 61 cDNA fragments were detected in these cultured cells by PCR amplification and amplification. Three options were selected for PCR amplification and validation. A fragment of 128bp was found at the 3'end of the genome. A portion of the 500bp DNA fragment was identified by more than 95 percent of the DNA fragments. The detailed structure of the DNA fragment was unknown. The gene fragments were analyzed and the mRNA of about 700bp was detected in PNH cells. Now, a number of PNH cases of freshly isolated cells and leukemia cells are used to confirm the expression of PNH cell cDNA, adjust the expression of PNH cell cDNA, and determine the sequence of PNH cells.