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植物の多細胞システム構築の基盤となる細胞分裂の制御機構

细胞分裂的控制机制，是植物多细胞系统构建的基础。

基本信息

批准号：
10182217
负责人：
新名惇彦
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 2000
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10182217/
关键词：
サイクリン Cdc2 細胞周期 Rbタンパク質

项目摘要

1. タバコのcdc2遺伝子と4種類のサイクリンD遺伝子をバキュロウイルス発現系を用いて昆虫細胞でタンパク質を合成した結果、Cdc2は4種類のサイクリンDと複合体を形成し、in vitroでRbタンパク質をリン酸化することがわかった。動物ではサイクリンDはサイクリン依存性キナーゼCDK4またはCDK6とのみ活性のある複合体を形成し、Rbタンパク質をリン酸化することから、植物の8bキナーゼは動物と異なることがわかった。2. サイクリンD遺伝子の発現様式を解析したところ、2種類のサイクリンDが植物ホルモンによって発現誘導されることがわかった。また、これらの遺伝子は細胞周期に伴って発現量が変動することがわかった。動物のサイクリンD遺伝子は増殖因子依存的に発現し、細胞周期に伴う変動は見られないことから、植物のサイクリンD遺伝子は転写レベルで動物とは異なる制御シグナルを受容している可能性が示唆された。3. タバコのE2Fホモログ遺伝子を単離し、ノザン解析によりG1期後期に発現量が一過的に上昇する発形パターンを示すことがわかった。また、サザン解析によりタバコには2、3コピーの類似遺伝子が存在することが示唆された。次に、動物のE2FはRbと共にDPファミリーの転写因子と結合することから、two-hybrid法で結合解析を行った結果、タバコE2FはタバコRbホモログと結合し、ヒトDP1とは弱いながら結合することが示唆された。E2FはDPと2量体を形成し、E2F認識部位に結合する。タバコE2FはヒトDP1存在下でも動物のE2F認識部位に結合しないことから、核タンパク質によるゲルシフト解析を行った。精製したタバコE2Fを用いて作製した抗体により、タバコE2F遺伝子のプロモーター領域にスーパーシフトか生じることがわかり、タバコE2FがDNAに特異的に結合する可能性が示唆された。

1. Cdc2 gene and 4 kinds of Cdc2 gene were synthesized in insect cells. Cdc2 gene and 4 kinds of Cdc2 gene were synthesized in vitro. Animal species are dependent on CDK4 and CDK6 for the formation of complexes. Plant species are dependent on CDK4 and CDK6 for the formation of complexes. 2. The expression of plant growth is analyzed and induced by two kinds of plant growth. In addition, the amount of these genes detected changes during the cell cycle. The occurrence of plant growth factor-dependent gene expression in animals, cell cycle variation, and plant growth factor-dependent gene expression in animals, and the possibility of plant growth factor-dependent gene expression in animals, cell cycle variation, and plant growth factor-dependent gene expression in animals. 3. E2F is the most important factor in the evolution of the G1 gene. 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, Second, animal E2F and Rb are combined with DP and Rb by two-hybrid method. E2F and DP are formed, and E2F recognize the position. In the presence of DP1, the E2F recognition site of the animal was analyzed. The possibility of DNA specific binding to purified E2F proteins was demonstrated.