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アラビドプシスのペルオキシダーゼ・アイソザイム遺伝子の発現制御

拟南芥过氧化物酶同工酶基因表达的调控

基本信息

批准号：
04257210
负责人：
新名惇彦
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ペルオキシダーゼは植物では重要な酸化反応の多くを触媒するが、高等植物のモデルとして、近年研究の盛んなアラビドプシスにおける遺伝子の構造と発現について検討した。1)CDNAの単離:既にペルオキシダーゼ遺伝子、prx Caとprx Eaを単離、構造決定したが、エキソン、イントロンの構造がゲノム遺伝子のみでは確定できなかった。そこでゲノム遺伝子の5'と3'非コード領域をプライマーにして、PCRを行いCDNAを得た。両遺伝子とも4エキソン、3イントロンから成ることが確認された。2)プロモーター活性の品価:両遺子の5'上流、約500 6Pをβ-グルクロニダーゼ(GUS)遺伝子につなぎ、タバコプロトプラストでGUSの一過性発現を調ベた。prx Eaの上流はCaMV35Sプロモーターの約10倍の活性を示し、5'側から順次欠失させると、段階的に活性が低下した。prx Caのプロモーター活性はCaMV35Sより低かった。3)トランスジェニックタバコにおける器官特異的発現の解析:prx Eaはアラビドプシスでは根部で特異的に転写物が見られた。5'上流1GUS融合遺伝子を導入したトランスゾェニックタバコでは、5'側-58 6p-390 6p、-281 6pいずれの断片でもGUS活性は根部で持異的に見られた。つまり根部特異的発現に関するシスエレメントは-281 6pより下流にあると結論された。prx Caはアラビドプシスでは根、茎、葉いずれにおいても発現が見られたが、トランスジェニックタバコにおいても、GUSの発現は低いながらも同じパターンを示した。4)酸性アイソザイム遺伝子のクローニング:prx Caは中性、prx Eaは塩基性アイソサイム遺伝子である。西洋ワサビの酸性ペハオキシダーゼのアミノ酸配列をもとに、PCR法でクローニングするためのプローブを設計した。

In recent years, research has been conducted on the structural evolution of the genetic material in plants and higher plants, which are important catalysts for acidification. 1)CDNA separation: both the selection of genes, prx Ca and prx Ea separation, structural determination, selection of genes, selection of genes, structural determination. The 5'and 3' non-female domains of DNA were identified by PCR. The first three months of the year, the first year, the first three months of the year, the first year, the first three months of the year, the second year, the first three years, the 2) The active species: 5'upstream of the seed, about 500 6P β-(GUS) gene, the transient occurrence of GUS gene. Prx Ea's up-stream CaMV35S activity is about 10 times higher than that of the down-stream CaMV 35 S activity. prx Ca Activity CaMV35S 3) Analysis of organ-specific occurrence:prx Ea has no root specific occurrence. 5'upstream 1GUS fusion gene introduced into the 5' side of the-58 6p-390 6p,-281 6p fragment contained in the 5'side of the 1GUS fusion gene fragment, the GUS activity of the root fragment remained different. The root specific occurrence is related to the root specific occurrence, and the root specific occurrence is related to the root specific occurrence. prx Ca is the root, stem and leaf of the plant. The root, stem and leaf of the plant appear in the middle of the plant. The root, stem and leaf of the plant appear in the middle of the plant. The GUS appears in the middle of the plant. 4)Acidity is the most important factor in the development of the disease, and the most important factor in the development of the disease. The acid sequence was designed by PCR.