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植物の多細胞システム構築の基盤となる細胞分裂の制御機構

细胞分裂的控制机制，是植物多细胞系统构建的基础。

基本信息

批准号：
11163217
负责人：
新名惇彦
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11163217/
关键词：
細胞周期サイクリン Cdc2 Rb G1 S期制御細胞分裂分化キナーゼ活性

项目摘要

まずタバコ培養細胞をアフィディコリンとプロピザマイドによりG2/M期に同調化して、経時的にサイクリンD抗体により免疫沈降した画分を用いてタバコRbタンパク質を基質にキナーゼ活性を検出した。その結果、Rdタンパク質に対するキナーゼ活性がG1期中期以降に上昇することがわかった。一方、サイクリンA抗体により免疫沈降した画分ではヒストンH1に対するキナーゼ活性は検出されたが、タバコRbタンパク質に対するキナーゼ活性は検出されなかった。この結果は植物由来のRbタンパク質をリン酸化するRbキナーゼの実体を初めて証明したことになり、今後植物のG1/S期の制御機構を理解する上で貴重な知見である。次に、タバコサイクリンDにGFP(green florescent protein)を融合させて、細胞内局在性を観察した。その結果、野生型のサイクリンDと融合したGFPは主に核に局在するが、リン酸化部位の変異体では核に局在しないことが分かった。この結果によりタバコサイクリンDの核局在性にサイクリンDのリン酸化が関与していることが分かった。また、この変異体をバキュロウイルス発現系により解析した結果、Cdc2aと結合するにもかかわらず、ヒストンH1キナーゼ活性がかなり低下したことより、サイクリンDのリン酸化はキナーゼ活性にも関与していることが分かった。なお、GFP融合サイクリンDがin vivoで機能していることを証明するため、GFP抗体を用いた免疫沈降により、4種のサイクリンDがCdc2aと複合体を形成してヒストンH1キナーゼ活性を示すことを証明した。また、レーザースキャニングサイトメトリーによりDNAの相対量を解析したところ、これらの形質転換体の中で、G1期の細胞の割合が減少してS期の細胞が増加するものが認められ、サイクリンDの高発現によりG1期が短縮する可能性が示唆された。

We need to learn how to do this. We need to learn how to assimilate G2G in the first half of the year. The antibody against G _ 2G and the antibody against G _ 2G at that time were detected by immuno-sedimentation assay. The activity of the Rb gene was detected by Elisa. The results showed that the activity of Rd was significantly higher in the middle of phase G1 than in the middle of phase G1. On the other hand, one party, the antibody A, the immune sink, the immune sink, the antibody, the antibody, the antibody, The results show that the origin of the plant is caused by the acidification of the Rb plant. The initial stage of the Rb system shows that the plant is suffering from the disease, and now the plant G1max S phase controls the system to understand the important information. The second, the second, the third, the second, the second The results showed that the main nuclear bureau of wild-type animal fusion GFP was divided into two parts in the first place and the acidified site. The results show that the nuclear bureau is in the process of acidification and acidification. The results of the analysis of the results of the analysis, the combination of the Cdc2a and the results of the analysis, the results, the results, the results The fusion of in vivo and GFP was used to detect the antigen, the GFP antibody was immunized with the vaccine, and the four kinds of antibody were immunized with the Cdc2a complex to form the antigen H1 antigen. In the first place, we need to know that there are many problems in the phase measurement of DNA, such as the number of cells in the body, the number of cells in the G1 phase, the number of cells in the S phase, the number of cells in the G1 phase.