成熟心筋細胞収縮機能調整に関する受容体・細部内情報伝達分子機構の解明-組換えアデノウイルスを用いて遺伝子導入した単一成熟心筋細胞を用いた生理機能解析-

阐明与成熟心肌细胞收缩功能调节相关的受体和细胞内信息传递的分子机制 - 使用重组腺病毒转染基因的单个成熟心肌细胞进行生理功能分析 -

• 批准号: 10877112
• 负责人: 上野 光
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877112/
• 关键词: 単一心筋細胞; スキンド細胞; 遺伝子導入; 張力測定; GTP結合蛋白質; アドレノセプター; アデノウイルス

1.ラット心室筋細胞を単離し、β-escinにて細胞膜に微小な穴をあけたスキンド細胞を準備した。この標本では細胞内のカルシウム濃度を自由に設定することができる。さらにこの単一心筋スキンド細胞の収縮を経時的に測定できることを確認した。2.上記のスキンド細胞をベータアゴニストで刺激すると、収縮蛋白質のカルシウム感受性が低下した。3.一方、アルファアゴニストで刺激すると、収縮蛋白質のカルシウム感受性は亢進し、筋小胞体からのカルシウム放出が惹起された。4.上記の反応は1mMのGDPβbSで抑制された。従ってGTP結合蛋白質の活性化を介していることが示唆される。5.以上の結果は、受容体機能さらに受容体下流の信号伝達系の少なくとも一部(GTP結合蛋白質など)を保持したまま微小孔から細胞内のカルシウム環境を自由に変化させながら収縮力の発生を測定できる実験系が確立されたことを意味している。6.心筋細胞でのPharmaco-mechanicalcouplingにおけるGTP結合蛋白質(Ras,Rac,Rho,Cdc42)の役割を解明するためにこれらの分子機能を特異的に阻害するそれぞれのDominant-negative変異体を作成し、さらにアデノウイルスベクターへの組み込みに成功した。今年度は作製したアデノウイルスを使ってこれらの分子を心筋細胞に遺伝子発現させ、GTP結合蛋白質の収縮力発生における役割を解明する予定である。

1. The cells of ventricular muscle cells are isolated and β-escin is prepared. This allows you to freely set the intracellular concentration of testosterone. This is the first time I've ever seen you. 2. Note that the sensitivity of the cell to stimulation and contraction proteins is low. 3. In addition, the sensitivity of protein to stimulation and the release of protein from muscle cells are stimulated. 4. The above results show that 1mM of GDPβbS can inhibit the growth of βbS. The activation of GTP binding protein is mediated by the activation of GTP binding protein. 5. These results indicate that the receptor function and receptor downstream signal transduction system are maintained in a small part (GTP binding protein), and that the intracellular environment in micropores is free to change. 6. GTP-binding proteins (Ras,Rac,Rho, Cdc42) in cardiac muscle cells are identified by pharmaco-mechanical coupling, and their molecular functions are specifically inhibited by Dominant-negative variants. This year, the molecular structure of the protein is controlled by the gene expression of the tendon cell, and the protein expression of the GTP binding protein is determined.

项目成果

Yamamoto H,et al.: "Roles of H-ras in signaling by TGF-β:H-ras is essential in activation of MAP kinase,partially involved in transcriptional activation by TGF-β but not in signaling of anti-proliferative" Eur.J.Biochem.in press.

Yamamoto H 等人：“H-ras 在 TGF-β 信号传导中的作用：H-ras 对于 MAP 激酶的激活至关重要，部分参与 TGF-β 的转录激活，但不参与抗增殖信号传导”Eur .J.Biochem.出版社。

Sakamoto T,et al: "A vitrctomy improves the transfection efficiency of adenoviral vector-mediated gene transfer to Muller cells." Gene Ther.5. 1088-1097 (1998)

Sakamoto T 等人：“玻璃体切除术提高了腺病毒载体介导的基因转移至 Muller 细胞的转染效率。”

Yukawa H,et al.: "In vitro growth suppression of vascular smooth muscle cells using adenovirus-mediated gene transfer of a truncated form of fibroblast growth factor receptor." Atherosclerosis. in press.

Yukawa H 等人：“利用腺病毒介导的成纤维细胞生长因子受体截短形式的基因转移来抑制血管平滑肌细胞的体外生长。”

Sato S,et al.: "Adrenoceptor-mediated regulation of myofibrillar Ca sensitivity through the GTP-binding protein-related mechanisms: tension recording in b-escub-skinned single rat cardiac cells with preserved receptor functions." Eur J Physiol.in press.

Sato S 等人：“肾上腺素受体介导的通过 GTP 结合蛋白相关机制调节肌原纤维 Ca 敏感性：在具有保留受体功能的 b-escub 皮肤单只大鼠心肌细胞中进行张力记录。”

Maru Y,et al.: "Virally activated Res cooperates wit integrin to induce tubulogenesis in sinusoidal endothelial cell lines." J.Cell.Physiol.176. 223-234 (1998)

Maru Y 等人：“病毒激活的 Res 与整合素协同诱导窦内皮细胞系中的肾小管发生。”