GFPトランスジェニックマウスからの細胞移植による造血動態の解析

GFP转基因小鼠细胞移植造血动力学分析

• 批准号: 10877160
• 负责人: 須田 年生
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877160/
• 关键词: GFPトランスジェニックマウス; 造血動態; AGM領域; 造血幹細胞; OP9 ストロマ細胞; 血管内皮細胞; 脾コロニー; PECAM-1

我が国で開発されたGFPトランスジェニックマウスを用いて造血動態の解析を行い、以下の成果を収めた。1) 胎生9.5日のGFPトランスジェニックマウス胎児Aorta/Gonad/Mesonephros(AGM)領域の細胞、および成体骨髄細胞から、FACSを用いて、造血幹細胞分画を分離し、OP9ストロマ細胞との共培養をおこなった。AGM由来の細胞とその支持細胞であるOP9とが、GFPを蛍光励起することにより、容易に区別できた。血液細胞と血管内皮細胞の分化をrealtimeでモニターしたところ、培養7日目より、AGMおよび骨髄の造血幹細胞分画から血管内皮細胞の分化が認められ、血管網の形成が観察された。2) GFPトランスジェニックマウスの成体骨髄から、造血幹細胞を分離し、致死量放射線照射した野生型マウスに移植し、これらの幹細胞/前駆細胞の分化を蛍光で追跡した。この結果、移植8日目および12日に形成される造血細胞の脾コロニーのなかに、GFP陽性の血管内皮細胞が観察された。さらに、脾細胞の内GFP陽性細胞の分画に、PECAM-1陽性細胞が存在することを確認した。以上、GFPトランスジェニックマウスを用いた解析により、造血細胞と血管内皮細胞の両方向への分化をin vitro,in vivoで明らかにすることができ、今後、2種の細胞系統への分岐機構を解析することが可能となった。

We have developed a system for analyzing hematopoietic dynamics, and the following results have been achieved. 1)The 9.5-day-old GFP Transus AGM origin cells and support cells are easily distinguished from OP9 and GFP by light excitation. The differentiation of blood cells and vascular endothelial cells was observed at realtime, 7 days after culture, AGM and bone marrow hematopoietic stem cells were observed at realtime, and the formation of vascular network was observed. 2)GFP gene expression in adult bone marrow, hematopoietic stem cell isolation, lethal dose of radiation in wild-type bone marrow transplantation, stem cell/progenitor cell differentiation tracking Results: Hematopoietic cells and GFP-positive vascular endothelial cells were observed from 8 to 12 days after transplantation. The presence of GFP positive cells and PECAM-1 positive cells in spleen cells was confirmed. In the future, it is possible to analyze the differentiation mechanism of two kinds of cell systems.