GFPトランスジェニックマウスからの細胞移植による造血動態の解析

GFP转基因小鼠细胞移植造血动力学分析

• 批准号: 10877160
• 负责人: 須田 年生
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877160/
• 关键词: GFPトランスジェニックマウス; 造血動態; AGM領域; 造血幹細胞; OP9 ストロマ細胞; 血管内皮細胞; 脾コロニー; PECAM-1

我が国で開発されたGFPトランスジェニックマウスを用いて造血動態の解析を行い、以下の成果を収めた。1) 胎生9.5日のGFPトランスジェニックマウス胎児Aorta/Gonad/Mesonephros(AGM)領域の細胞、および成体骨髄細胞から、FACSを用いて、造血幹細胞分画を分離し、OP9ストロマ細胞との共培養をおこなった。AGM由来の細胞とその支持細胞であるOP9とが、GFPを蛍光励起することにより、容易に区別できた。血液細胞と血管内皮細胞の分化をrealtimeでモニターしたところ、培養7日目より、AGMおよび骨髄の造血幹細胞分画から血管内皮細胞の分化が認められ、血管網の形成が観察された。2) GFPトランスジェニックマウスの成体骨髄から、造血幹細胞を分離し、致死量放射線照射した野生型マウスに移植し、これらの幹細胞/前駆細胞の分化を蛍光で追跡した。この結果、移植8日目および12日に形成される造血細胞の脾コロニーのなかに、GFP陽性の血管内皮細胞が観察された。さらに、脾細胞の内GFP陽性細胞の分画に、PECAM-1陽性細胞が存在することを確認した。以上、GFPトランスジェニックマウスを用いた解析により、造血細胞と血管内皮細胞の両方向への分化をin vitro,in vivoで明らかにすることができ、今後、2種の細胞系統への分岐機構を解析することが可能となった。

I で が countries 発 さ れ た GFP ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を with い て hematopoietic line dynamic analytical を の い, the following の を 収 め た. 1) viviparous 9.5 day の GFP ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス tire where Aorta/Gonad Mesonephros (AGM) field の cells, お よ び adult bone marrow cells か ら, both FACS を with い て, hematopoietic stem cell separation points draw を し, OP9 ス ト ロ マ cells と の trained を お こ な っ た. AGM origin の cells と そ の support cells で あ る OP9 と が, GFP を 蛍 excitation light up す る こ と に よ り, easy に difference で き た. Blood cells と endothelial cells の を realtime で モ ニ タ ー し た と こ ろ, cultivating 7 orders よ り, AGM お よ び bone marrow の hematopoietic stem cells points draw か ら endothelial cells の が recognize め ら れ, vascular net の form が 観 examine さ れ た. 2) GFP ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス の adult bone marrow か ら, hematopoietic stem cell separation を し, lethal dose radiation し た wild-type マ ウ ス し に transplantation and こ れ ら の stem cells/former 駆 の differentiation を 蛍 で light tracing し た. こ の results 8 orders, transplantation お よ び 12 に form さ れ る hematopoietic cells の spleen コ ロ ニ ー の な か に, GFP positive の endothelial cells が 観 examine さ れ た. Youdaoplaceholder0, the <s:1> subdivision of GFP-positive cells in the <s:1> of spleen cells に, and the が presence of PECAM-1 positive cells する とを confirm the た た. Above, GFP ト ラ ン ス ジ ェ ニ ッ ク マ ウ ス を with い た parsing に よ り, hematopoietic cells と endothelial cells の struck direction へ を の differentiation in vitro, in vivo で Ming ら か に す る こ と が で き system, in the future, two の cells へ の branching institutions を parsing す る こ と が may と な っ た.