肝細胞癌における腫瘍ワクチンおよびTRAILを用いた腫瘍特異的遺伝子治療

使用肿瘤疫苗和 TRAIL 治疗肝细胞癌的肿瘤特异性基因治疗

• 批准号: 10877189
• 负责人: 柳衛 宏宣
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10877189/
• 关键词: 免疫遺伝子治療; 補助刺激分子; 腫瘍抗原特異的キラーT細胞; 腫瘍ワクチン; 腫瘍抗原エピトープ; C型肝炎ウイルス細胞障害領域; アポトーシス; 樹状細胞; 細胞融合; TRAIL

我々は、これまで肝癌細胞をモデルに腫瘍ワクチンおよびTRAILの開発をめざして、腫瘍細胞研究を以下の二点に注目して解析してきた。1)T細胞が認識する腫瘍抗原の同定。2)C型肝炎ウイルスの肝細胞障害作用。以上の二点についてこれまでの成果を述べる。1)細胞性免疫応答調節に関与するとされるB7-1分子をマウス肝細胞癌Hepa-6(H-2^b)にlipofectionによりマウスB7-1遺伝子を導入し、B7-1分子を発現させたtransfectant(L1)を作製した。さらに、transfectant(L1)を腹腔内に免疫した同系マウス脾臓細胞より、Hepa-6特異的CD8^+ class I MHC(D^b)分子拘束性CTL lineを樹立し、^<51>Cr releasing assayによる傷害活性を測定した。樹立したCTLは正常肝細胞をほとんど傷害せず、transfectant(L1)、Hepa-6を同程度に傷害排除する一方、他の同系腫瘍細胞に対する傷害活性は見られなかった。このCTL lineが抗腫瘍作用を持つことを、同種移植・自家移植によるinvivoでも明らかにした。Hepa-6特異的CTL lineが、Hepa-6表面のclass I MHC(D^b)分子内より提示される抗原epitopeをMild acid elution methodにより分離精製した。精製した腫瘍epitopeは、事実同種細胞上でT細胞を活性化し、同系肝細胞癌株を認識し、^<51>Cr releasing assayにて殺傷されることを確認した。現在、更にこれらepitopeをHPLCで精製し、肝細胞癌共通抗原epitopeを含んでいるかアミノ酸配列を解析している。2)肝細胞癌の主な原因の一つであるC型肝炎ウイルスの中に細胞障害を引き起こす領域を同定した。この領域には、アポトーシスを引き起こし肝細胞を死に至らしめる作用と核染色体異常をおこす作用がある事を見いだした。この領域をINES領域と名付けた。INES領域は、ロイシンとイソロイシンが多く含まれている特異な構造をとっていた。細胞内のRanとExportinに作用して、染色体構造を傷害している事が判明した。そして、肝細胞にアポトーシスを引き起こしていた。詳細なシグナル伝達系について検討を行っている。

The following two points of attention were paid to the development of TRAIL and tumor cell research. 1)T cells recognize tumor antigen identity. 2)Liver cell damage caused by hepatitis c virus infection. The above two points are discussed in detail. 1)B7-1 is involved in cellular immune response regulation, and its expression in hepatocellular carcinoma Hepa-6(H-2b) is controlled by lipofection, B7 -1 gene introduction, and B7-1 gene development. In addition, the cytotoxic activity of CD8^+ class I MHC(D^b) molecules binding CTL lines in Hepa-6-specific spleen cells and Hepa-6<51>-specific spleen cells was determined by the intraperitoneal immune response assay and the release assay. CTL activity against normal liver cells, transfectant(L1), Hepa-6 and other syngeneic tumor cells was also detected. The CTL line has anti-tumor effects, allotransplantation and autotransplantation. Hepa-6 specific CTL line, Hepa-6 surface class I MHC(D^b) intramolecular cleavages, antigen epitope, Mild acid elution method, isolation and purification T-cell activation on homologous cells was confirmed by purified epitope <51>assay. Now, we need to refine the epitope by HPLC and analyze the acid sequence of hepatocellular carcinoma common antigen epitope. 2)The main causes of hepatocellular carcinoma are hepatitis C, and cellular damage is common in the field. This is the first time I've ever seen a human. The name of the domain is INES. The INES domain contains many unique structures. The role of Ran and Exportin in cells and the structure of chromosomes are clearly identified. The liver cells were removed from the tissue. The details of the search are as follows:

项目成果

Nakatsuka,H., Sugiyama,H., et al.: "Purificaiton of antigenic peptide from murine hepatoma cells recognized by class-I major histocompatibility complex molecure-restrited cytotoxic T-lymphocytes induced B-7-1-gene transfected hepatoma cells"Journal of Hep

Nakatsuka,H., Sugiyama,H., et al.：“由 I 类主要组织相容性复合物分子限制的细胞毒性 T 淋巴细胞诱导的 B-7-1 基因转染的肝癌细胞识别的鼠肝癌细胞的抗原肽的纯化”

Sugiyama,H., Yanagie,H., et al.: "Identification of nuclear export signals in human type C hepatitis virus"FASEB Journal. 13(7). 1492 (1999)

Sugiyama,H.、Yanagie,H.等人：“人丙型肝炎病毒核输出信号的鉴定”FASEB 杂志。

Sugiyama,H., Yanagie,H., et al: "Analysis of hepatitis C virus mediated nuclear deformation"Journal of Virology. (in press).

Sugiyama,H.、Yanagie,H.等人：“丙型肝炎病毒介导的核变形分析”病毒学杂志。