ラミニン細胞接着ペプチドによるがん細胞の浸潤促進メカニズムの解明

阐明层粘连蛋白细胞粘附肽促进癌细胞侵袭的机制

• 批准号: 11139201
• 负责人: 野水 基義
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11139201/
• 关键词: がん転移; 細胞浸潤; ラミニン; 基底膜; ヘパリン; 合成ペプチド; 細胞接着; 細胞外マトリックス

基底膜の主要糖蛋白ラミニンの活性ペプチドの中で最も強くがん細胞の浸潤転移を促進するC-16(KAFDITYVRLKF)とA-13(RQVFVAYIIIKA)の2種類のレセプターの同定を目的に研究を行った。(1)C-16をセファロースビーズに固定しアフィニティーカラムを調製した。このペプチドアフィニティーカラムにHT-1080ヒト線維肉腫細胞の細胞表面をビオチン化したcell lysateをアプライし、塩濃度を増加させながら溶出した。種々の塩濃度による溶出画分のSDS-PAGEおよびwestern blotによる分析から、C-16カラムにインテグリンαvβ3が結合することがわかった。(2)C-16によるがん細胞からのマトリックスメタロプロテアーゼの分泌をゼラチンザイモグラフィーを用いて測定した。C-16はB16-F10マウスメラノーマ細胞に対してMMP-9の分泌を促進した。(3)C-16のアミノ酸を一つずつアラニンに置換した10種類のペプチドを合成しペプチドをプレートにコートする方法とビーズに結合する方法で細胞接着活性を測定した。6位のThrと7位のTyrをアラニンに置換したペプチドはプレートアッセイにおいて細胞接着活性が低下することがわかった。また、9位のArgと11位のLysをアラニンに置換したペプチドはビーズアッセイにおいて全く細胞接着活性を示さなかった。これらのことから、6位のThrと7位のTyrがプレートアッセイにおいて重要な働きをしていることが、また、9位のArgと11位のLysがビーズアッセイにおいて必須であることがわかった。以上のように、2種類のアッセイ系で細胞接着活性の結果が異なることから、C-16の細胞接着活性には細胞膜上の複数のレセプターが関与していることが示唆された。

Basement membrane の mainly glycoprotein ラ ミ ニ ン の active ペ プ チ ド の で in the most strong も く が の ん cell infiltrate planning move を promote す る C - 16 (KAFDITYVRLKF) と A - 13 (RQVFVAYIIIKA) の 2 kinds の レ セ プ タ ー の set purpose を に research を row っ た. (1)C-16をセファロ スビ スビ ズに ズに fixed <s:1> アフィニティ カラムを カラムを modulated た た. こ の ペ プ チ ド ア フ ィ ニ テ ィ ー カ ラ ム に HT - 1080 ヒ ト line d meat swollen cells の surface を ビ オ チ ン change し た cell lysate を ア プ ラ イ し, salt concentration を raised さ せ な が ら dissolution し た. Kind of 々 の salt concentration に よ る dissolution draw points の sds-page お よ び western blot に よ る analysis か ら, C - 16 カ ラ ム に イ ン テ グ リ ン alpha v beta 3 が combining す る こ と が わ か っ た. (2) C - 16 に よ る が ん cells か ら の マ ト リ ッ ク ス メ タ ロ プ ロ テ ア ー ゼ の secretion を ゼ ラ チ ン ザ イ モ グ ラ フ ィ ー を with い て determination し た. C-16 に B16-F10 <s:1> ウスメラノ ウスメラノ に に cells に secrete を against <s:1> てMMP-9 and promote <s:1> た. (3) C - 16 の ア ミ ノ acid を a つ ず つ ア ラ ニ ン に replacement し た 10 kinds の ペ プ チ ド を synthetic し ペ プ チ ド を プ レ ー ト に コ ー ト す る method と ビ ー ズ に combining す る で cells then determination of active を し た. Six の Thr と seven の Tyr を ア ラ ニ ン に replacement し た ペ プ チ ド は プ レ ー ト ア ッ セ イ に お い て cells then active low が す る こ と が わ か っ た. ま た, nine の Arg と 11 の Lys を ア ラ ニ ン に replacement し た ペ プ チ ド は ビ ー ズ ア ッ セ イ に お い て く cells then all active を shown さ な か っ た. こ れ ら の こ と か ら, six の Thr と seven の Tyr が プ レ ー ト ア ッ セ イ に お い て important な 働 き を し て い る こ と が, ま た, nine の Arg と 11 の Lys が ビ ー ズ ア ッ セ イ に お い て must で あ る こ と が わ か っ た. Above の よ う に, 2 species の ア ッ セ イ department で の then activity results が different な る こ と か ら activity then cells, C - 16 の に は membrane の plural の レ セ プ タ ー が masato and し て い る こ と が in stopping さ れ た.

项目成果

Peter K.Nielsen: "Identification of a major heparin and cell binding site in the LG4 module of the laminin α5 chain"J.Biol.Chem.. (2000)

Peter K.Nielsen：“层粘连蛋白 α5 链 LG4 模块中主要肝素和细胞结合位点的鉴定”J.Biol.Chem.. (2000)

Lourdes M.Ponce: "Identification of endothelical cell binding sites on the laminin γ1 chain"Circulation Res.. 84. 688-694 (1999)

Lourdes M.Ponce：“层粘连蛋白 γ1 链上内皮细胞结合位点的鉴定”循环研究 84. 688-694 (1999)