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ラミニン細胞接着ペプチドによるがん細胞の浸潤促進メカニズムの解明

阐明层粘连蛋白细胞粘附肽促进癌细胞侵袭的机制

基本信息

批准号：
11139201
负责人：
野水基義
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

基底膜の主要糖蛋白ラミニンの活性ペプチドの中で最も強くがん細胞の浸潤転移を促進するC-16(KAFDITYVRLKF)とA-13(RQVFVAYIIIKA)の2種類のレセプターの同定を目的に研究を行った。(1)C-16をセファロースビーズに固定しアフィニティーカラムを調製した。このペプチドアフィニティーカラムにHT-1080ヒト線維肉腫細胞の細胞表面をビオチン化したcell lysateをアプライし、塩濃度を増加させながら溶出した。種々の塩濃度による溶出画分のSDS-PAGEおよびwestern blotによる分析から、C-16カラムにインテグリンαvβ3が結合することがわかった。(2)C-16によるがん細胞からのマトリックスメタロプロテアーゼの分泌をゼラチンザイモグラフィーを用いて測定した。C-16はB16-F10マウスメラノーマ細胞に対してMMP-9の分泌を促進した。(3)C-16のアミノ酸を一つずつアラニンに置換した10種類のペプチドを合成しペプチドをプレートにコートする方法とビーズに結合する方法で細胞接着活性を測定した。6位のThrと7位のTyrをアラニンに置換したペプチドはプレートアッセイにおいて細胞接着活性が低下することがわかった。また、9位のArgと11位のLysをアラニンに置換したペプチドはビーズアッセイにおいて全く細胞接着活性を示さなかった。これらのことから、6位のThrと7位のTyrがプレートアッセイにおいて重要な働きをしていることが、また、9位のArgと11位のLysがビーズアッセイにおいて必須であることがわかった。以上のように、2種類のアッセイ系で細胞接着活性の結果が異なることから、C-16の細胞接着活性には細胞膜上の複数のレセプターが関与していることが示唆された。

The activity of major glycoproteins in basement membrane was the strongest among all the active proteins in basement membrane. Two kinds of proteins, C-16(KAFDITYVRLKF) and A-13(RQVFVAYIIIKA), were studied for the same purpose. (1)C-16 is fixed in the middle of the game. The cell surface of HT-1080-T cells was characterized by high concentration of cell lysate and high dissolution rate. SDS-PAGE and western blot analysis of the dissolution profile of the species concentration, C-16 protein concentration, αvβ3 binding, and C-16 protein concentration. (2) The C-16 was tested for its ability to isolate and isolate cells. C-16 and B16-F10 promote MMP-9 secretion. (3)C-16 was synthesized from 10 kinds of different acids, and the cell adhesion activity was measured by the method of combination. Tyr at position 6 and position 7 is replaced by a low level of cellular activity. Arg at position 9 and Lys at position 11 were replaced by the same group. The 6-bit Thr and the 7-bit Tyr are required to be replaced by the 9-bit Arg. As mentioned above, the results of cell adhesion activity in the two types of Acacia lines are different, and the cell adhesion activity of C-16 is related to the multiple cells on the cell membrane.