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ラミニン細胞接着ペプチドによるがん細胞の浸潤促進メカニズムの解明

阐明层粘连蛋白细胞粘附肽促进癌细胞侵袭的机制

基本信息

批准号：
11139201
负责人：
野水基義
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

基底膜の主要糖蛋白ラミニンの活性ペプチドの中で最も強くがん細胞の浸潤転移を促進するC-16(KAFDITYVRLKF)とA-13(RQVFVAYIIIKA)の2種類のレセプターの同定を目的に研究を行った。(1)C-16をセファロースビーズに固定しアフィニティーカラムを調製した。このペプチドアフィニティーカラムにHT-1080ヒト線維肉腫細胞の細胞表面をビオチン化したcell lysateをアプライし、塩濃度を増加させながら溶出した。種々の塩濃度による溶出画分のSDS-PAGEおよびwestern blotによる分析から、C-16カラムにインテグリンαvβ3が結合することがわかった。(2)C-16によるがん細胞からのマトリックスメタロプロテアーゼの分泌をゼラチンザイモグラフィーを用いて測定した。C-16はB16-F10マウスメラノーマ細胞に対してMMP-9の分泌を促進した。(3)C-16のアミノ酸を一つずつアラニンに置換した10種類のペプチドを合成しペプチドをプレートにコートする方法とビーズに結合する方法で細胞接着活性を測定した。6位のThrと7位のTyrをアラニンに置換したペプチドはプレートアッセイにおいて細胞接着活性が低下することがわかった。また、9位のArgと11位のLysをアラニンに置換したペプチドはビーズアッセイにおいて全く細胞接着活性を示さなかった。これらのことから、6位のThrと7位のTyrがプレートアッセイにおいて重要な働きをしていることが、また、9位のArgと11位のLysがビーズアッセイにおいて必須であることがわかった。以上のように、2種類のアッセイ系で細胞接着活性の結果が異なることから、C-16の細胞接着活性には細胞膜上の複数のレセプターが関与していることが示唆された。

The main glycoprotein of the basement membrane, ラミニンのactive ペプチドの中, the strongest, infiltration and migration promotion of cells, するC-16 (KAFDI TYVRLKF) and A-13(RQVFVAYIIIKA)のレセプターの Same purpose research and execution. (1) C-16 をセファロースビーズに Fixed しアフィニティーカラムを Modulated した.このペプチドアフィニティーカラムにHT-1080ヒトLINED sarcoid cell のCell surface をビオチン化したcell lysate をアプライし, concentration をincrease and させながら dissolve した. Kind of concentration, dissolution analysis, SDS-PAGE, Western Blot による analysis から, C-16 カラムにインテグリンαvβ3が binding することがわかった. (2)C-16 によるがん cell からのマトリックスメタロプロThe secretion of テアーゼのをゼラチンザイモグラフィーを is measured with いて. C-16はB16-F10マウスメラノーマcells promote the secretion of MMP-9. (3) C-16 のアミノ acid を一つずつアラニンに 10 kinds of のペプチドを synthesized しペThe プチドをプレートにコートする method and the とビーズに combined with the する method and the cell adhesion activity を determination した. 6-digit thr and 7-digit tyr replacement The activity of レートアッセイにおいて cells has decreased and the activity has decreased.また、9-digit Arg and 11-digit Lysをアラニンに Replacement したペプチドはビーズアッセイにおいてwhole cells are then active をshows さなかった.これらのことから、6-digit のThrと7-digit のTyrがプレートアッセイにおいてimportant な働きをしていることが、また、9-digit のArgと11-digit のLysがビーズアッセイにおいてmust be であることがわかった. The results of the above-mentioned cell adhesion activity of 2 types of のアッセイ series のようにがdifferent なることから, C-1 6のCells are connected to active cells on the cell membrane.