生体類似機能性ミニタンパク質・プチラミニンの創製

生物仿制药功能性小蛋白petiraminin的创建

• 批准号: 12878163
• 负责人: 野水 基義
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 2001
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12878163/
• 关键词: ラミニン; ペプチド; キトサン; 細胞接着; インテグリン; ヘパリン; プロテオグリカン; 神経突起伸長

ラミニン活性ペプチドはラミニンに比べ遥かに活性が弱く活性の増強が望まれている。本研究では、ラミニン活性ペプチドを複合化することにより、天然のラミニンと同等な活性をもつ生体類似機能性ミニタンパク質・プチラミニンの創製を目的とした。ラミニンのアミノ酸配列をすべて網羅した673種類の合成ペプチドを用いたスクリーニングで最も強い細胞接着活性を示したA13(RQVFQVAYIIIKA),A99(AGTFALRGDNPQG),C16(KAFDITYVRLKF),AG73(RKRLQVQLSIRT)の4種類をキトサン膜に化学的に結合させ、種々の細胞を用い接着活性を測定した。キトサン膜にはいずれの細胞も接着しなかったが、活性ペプチドを付加したキトサン膜は細胞特異的な接着活性を示すとともに、ペプチドのみを用いた場合に比べ活性の増強がみられた。線維芽細胞を用いた実験から、キトサン膜にA99を付加したA99-キトサン膜上で細胞は伸展を示しアクチンファイバーの形成がみられたが、AG73-キトサン膜上では星状に伸展しラフリング構造を形成することがわかった。また、線維芽細胞のA99-キトサン膜への接着はEDTAによって、AG73-キトサン膜への接着活性はヘパリンによって阻害されたことから、これらが各々インテグリンおよびシンデカンをレセプターとしていることが示唆された。さらに、AG73とA99を1:5〜25の比でキトサン膜に結合させたとき最も強く細胞の接着及び伸展活性を促進することがわかった。この方法を用いることにより、細胞接着におけるインテグリンとシンデカンとの相互作用を検討中である。以上の実験において、細胞接着ペプチドを組み合わせることによりラミニンと同等の活性をもつミニタンパク質を創製し、医用工学分野への応用の基礎を構築することができた。

ラ ミ ニ ン active ペ プ チ ド は ラ ミ ニ ン に than べ remote か に active が looking weak く active の raised strong が ま れ て い る. This study で は, ラ ミ ニ ン active ペ プ チ ド composite を す る こ と に よ り, natural の ラ ミ ニ ン と equal な active を も つ raw body similar functional ミ ニ タ ン パ ク qualitative · プ チ ラ ミ ニ ン の created を purpose と し た. ラ ミ ニ ン の ア ミ ノ acid with column を す べ て snare し た 673 kinds の synthetic ペ プ チ ド を with い た ス ク リ ー ニ ン グ で the most strong も い cells then active を し た A13 (RQVFQVAYIIIKA), A99 (AGTFALRGDNPQG), C16 (KAFDITYVRLKF), AG73 (fairly RK RLQVQLSIRT) <s:1> 4 types of をキトサ <s:1> membrane に chemistry に binding させ, species of 々 <s:1> <s:1> cells を を determination of <s:1> subsequent activity を た. キ ト サ ン membrane に は い ず れ も の cells then し な か っ た が, active ペ プ チ ド を plus し た キ ト サ ン membrane は を specific な then activity in す と と も に, ペ プ チ ド の み を with い に た occasion than べ active の raised が み ら れ た. Line d を bud cells with い た be 験 か ら, キ ト サ ン membrane に A99 を plus し た A99 - キ ト サ ン stretch membrane cells で は を shown し ア ク チ ン フ ァ イ バ ー の form が み ら れ た が, AG73 キ ト サ ン membrane で は stellate に stretch し ラ フ リ ン を グ structure form す る こ と が わ か っ た. ま た, line d bud cells の A99 - キ ト サ ン membrane へ の then は EDTA に よ っ て, AG73 キ ト サ ン membrane へ の then active は ヘ パ リ ン に よ っ て resistance against さ れ た こ と か ら, こ れ ら が each 々 イ ン テ グ リ ン お よ び シ ン デ カ ン を レ セ プ タ ー と し て い る こ と が in stopping さ れ た. さ ら に, AG73 と A99 を 1:5 ~ 25 の than で キ ト サ ン membrane に combining さ せ た と き most strong も く cells の then and び extend active を promote す る こ と が わ か っ た. こ の way を with い る こ と に よ り, cells then に お け る イ ン テ グ リ ン と シ ン デ カ ン と の interaction を 検 beg in で あ る. Above の be 験 に お い て, cells then ペ プ チ ド を group み close わ せ る こ と に よ り ラ ミ ニ ン と equal の active を も つ ミ ニ タ ン パ ク qualitative を created し, medical engineering eset へ の 応 build with based を の す る こ と が で き た.

项目成果

Motoyoshi Nomizu: "Cell Attachment and neurite outgrowth activities of laminin peptide-conjugated chitosan membrane"Peptides : Frontier of Peptide Science. (in press.). (2002)

Motoyoshi Nomizu：“层粘连蛋白肽缀合壳聚糖膜的细胞附着和神经突生长活性”肽：肽科学前沿。

Kozue Kato: "Neurite Outgrowth Promoting Sites on the Laminin Alpha 3 Chain"Peptide Science 2001. 217-220 (2002)

Kozue Kato：“层粘连蛋白 Alpha 3 链上的神经突生长促进位点”肽科学 2001. 217-220 (2002)

Mochizuki Mayumi: "Conjugation of laminin derived cell adhesive peptides on a chitosan membrane and their biological activity"Peptide Science 2000. (in press). (2001)

Mochizuki Mayumi：“层粘连蛋白衍生的细胞粘附肽在壳聚糖膜上的缀合及其生物活性”Peptide Science 2000。（出版中）。