生体類似機能性ミニタンパク質・プチラミニンの創製

生物仿制药功能性小蛋白petiraminin的创建

基本信息

批准号：
12878163
负责人：
野水基義
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

ラミニン活性ペプチドはラミニンに比べ遥かに活性が弱く活性の増強が望まれている。本研究では、ラミニン活性ペプチドを複合化することにより、天然のラミニンと同等な活性をもつ生体類似機能性ミニタンパク質・プチラミニンの創製を目的とした。ラミニンのアミノ酸配列をすべて網羅した673種類の合成ペプチドを用いたスクリーニングで最も強い細胞接着活性を示したA13(RQVFQVAYIIIKA),A99(AGTFALRGDNPQG),C16(KAFDITYVRLKF),AG73(RKRLQVQLSIRT)の4種類をキトサン膜に化学的に結合させ、種々の細胞を用い接着活性を測定した。キトサン膜にはいずれの細胞も接着しなかったが、活性ペプチドを付加したキトサン膜は細胞特異的な接着活性を示すとともに、ペプチドのみを用いた場合に比べ活性の増強がみられた。線維芽細胞を用いた実験から、キトサン膜にA99を付加したA99-キトサン膜上で細胞は伸展を示しアクチンファイバーの形成がみられたが、AG73-キトサン膜上では星状に伸展しラフリング構造を形成することがわかった。また、線維芽細胞のA99-キトサン膜への接着はEDTAによって、AG73-キトサン膜への接着活性はヘパリンによって阻害されたことから、これらが各々インテグリンおよびシンデカンをレセプターとしていることが示唆された。さらに、AG73とA99を1:5〜25の比でキトサン膜に結合させたとき最も強く細胞の接着及び伸展活性を促進することがわかった。この方法を用いることにより、細胞接着におけるインテグリンとシンデカンとの相互作用を検討中である。以上の実験において、細胞接着ペプチドを組み合わせることによりラミニンと同等の活性をもつミニタンパク質を創製し、医用工学分野への応用の基礎を構築することができた。

层粘连蛋白活性肽的活性远低于层粘连蛋白，并且有望增强其活性。这项研究旨在通过结合层粘连蛋白活性肽来创建一种类似生物样的功能性小蛋白质petit层蛋白，其活性与天然层粘连蛋白相同。四种类型的A13（RQVFQVayiiika），A99（AgtfalrgDNPQG），C16（kafdityvrlkf）和AG73（rkrlQVQLSIRT）（rkrlqVQLSIRT），在使用673合成肽层筛选时，表现出最强的细胞粘附活性，以覆盖673合成的氨基酸酯酸酯酸酯剂，以覆盖673合成的氨基酸酯。膜，并使用各种细胞测量粘附活性。尽管没有一个粘附在壳聚糖膜上的细胞，但与仅使用肽时相比，壳聚糖膜与活性肽的添加表现出细胞特异性粘附活性，并且活性增加。使用成纤维细胞进行的实验表明，在A99-吉他膜上扩展了细胞，并在壳聚糖膜中添加了A99，并形成了肌动蛋白纤维，但在AG73-壳聚糖膜上形成了肌动蛋白纤维，发现这些细胞以星形形成了恒星形状并形成了皱纹结构。此外，由于EDTA抑制了成纤维细胞对A99-壳膜膜的粘附，因此肝素抑制了对AG73-吉他膜的粘附活性，这表明这些受体分别是整联蛋白和Syndecan。此外，发现AG73和A99以1：5至25的比例与壳聚糖膜结合，并且发现最强烈地促进细胞粘附和延伸活性。使用这种方法，正在研究整联蛋白和联合蛋白在细胞粘附中的相互作用。在上面的实验中，通过将细胞粘附肽结合在一起，创建了与层粘连蛋白相当的活性的小蛋白质，并建立了医学工程领域的应用基础。