课题基金 / 基金详情

選択的スプライシングのリン酸化制御機構

選択的スプライシングのリン酸化制御機構
选择性剪接的磷酸化控制机制
批准号：
11155208
负责人：
萩原 正敏
金额：
$1.02万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
项目状态：
已结题
起止时间：
1999 至 --
来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11155208/
关键词：
SRPKSF2ASFsplicing

项目摘要

项目成果

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中文摘要
翻译
我々はSRPK1と分裂酵母の細胞周期制御遺伝子Dsk1の高い相同性に着目して、マウス脳mRNAより新規のSR蛋白リン酸化酵素をクローニングし、SRPK2と名付けた。大腸菌で発現させたSRPK1とSRPK2を用いて、GST-SF2Pull-Down Kinase Assayを行ったところ、SF2/ASFに結合してリン酸化活性を示した。実際に細胞内でもSF2/ASFとSRPKが複合体を形成しているかどうか調べるためCOS7細胞にSF2/ASFとSRPKを共発現させ、共沈実験およびkinase-assayを行ったところ、SF2/ASFとSRPKは細胞内においても結合していることが確認できた。またSF2/ASFのdeletion mutantを用いた解析により、このSF2/SRPK複合体の形成にはRSドメインが必須で、その結合部位はSRPKによるリン酸化部位と一致することが確認できた。さらにSF2/ASFのリン酸化状態により結合能に差がみられるかを調べたところ、リン酸化されていないSF2/ASFとSRPKは複合体を形成するが、リン酸化されたSF2/ASFとSRPKはもはや結合しなかった。リン酸化活性化能をもたないSRPK2^<K108R>をHeLa細胞内で発現させたところ、核内でspeckled patternを示していたSF2/ASFは核外に移行した。この結果よりSF2/ASFの細胞内局在は、SRPKによって制御されている可能性があると考えられる。
英文摘要
我々はSRPK1と分裂酵母の細胞周期制御遺伝子Dsk1の高い相同性に着目して、マウス脳mRNAより新規のSR蛋白リン酸化酵素をクローニングし、SRPK2と名付けた。大腸菌で発現させたSRPK1とSRPK2を用いて、GST-SF2Pull-Down Kinase Assayを行ったところ、SF2/ASFに結合してリン酸化活性を示した。実際に細胞内でもSF2/ASFとSRPKが複合体を形成しているかどうか調べるためCOS7細胞にSF2/ASFとSRPKを共発現させ、共沈実験およびkinase-assayを行ったところ、SF2/ASFとSRPKは細胞内においても結合していることが確認できた。またSF2/ASFのdeletion mutantを用いた解析により、このSF2/SRPK複合体の形成にはRSドメインが必須で、その結合部位はSRPKによるリン酸化部位と一致することが確認できた。さらにSF2/ASFのリン酸化状態により結合能に差がみられるかを調べたところ、リン酸化されていないSF2/ASFとSRPKは複合体を形成するが、リン酸化されたSF2/ASFとSRPKはもはや結合しなかった。リン酸化活性化能をもたないSRPK2^<K108R>をHeLa細胞内で発現させたところ、核内でspeckled patternを示していたSF2/ASFは核外に移行した。この結果よりSF2/ASFの細胞内局在は、SRPKによって制御されている可能性があると考えられる。
期刊论文(2)
专著(0)
科研奖励(0)
会议论文
Nagai Y, Miyazaki M, Aoki R, Zama T, Inoue S, Hirose K, Iino M, Hagiwara M: "Detection of cAMP-induced phosphorylation with a novel fluorescent indicator."Nat.Biotechnol.. (in press). (2000)
Nagai Y、Miyazaki M、Aoki R、Zama T、Inoue S、Hirose K、Iino M、Hagiwara M：“用新型荧光指示剂检测 cAMP 诱导的磷酸化。”Nat.Biotechnol..（出版中）。
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Koizumi, J., Okamoto, Y., Onogi, H., Maekawa, A., Hagiwara, M.: "The subcellular localization of SF2/ASF is regulated by the direct interaction with SR protein kinases (SRPKS)"J. Biol. Chem.. 274. 11125-11131 (1999)
Koizumi, J.、Okamoto, Y.、Onogi, H.、Maekawa, A.、Hagiwara, M.：“SF2/ASF 的亚细胞定位是通过与 SR 蛋白激酶 (SRPKS) 的直接相互作用来调节的”J.
DOI： --
发表时间：
期刊：
影响因子： --
作者： []
通讯作者：
Synthetic investigation of pathological phase separation of RNA-binding proteins
  • 批准号：
    21H05042
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (S)
  • 资助金额：
    $121.14万
  • 财政年份：
    2021
  • 负责人：
    萩原 正敏
  • 依托单位：
    Kyoto University
トランスクリプトームの人為的操作による遺伝病の治療
  • 批准号：
    15H02505
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (A)
  • 资助金额：
    $12.65万
  • 财政年份：
    2015
  • 负责人：
    萩原 正敏
  • 依托单位：
    Kyoto University
ヘルペスウイルスRNAの核外輸送制御機構の解明
  • 批准号：
    19041027
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 资助金额：
    $4.8万
  • 财政年份：
    2007
  • 负责人：
    萩原 正敏
  • 依托单位：
    Tokyo Medical and Dental University
ケミカルジェネティクスによる生体機能の解明
  • 批准号：
    18631008
  • 项目类别：
    Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
  • 资助金额：
    $2.18万
  • 财政年份：
    2006
  • 负责人：
    萩原 正敏
  • 依托单位：
    Tokyo Medical and Dental University
国内基金
海外基金
lncRNA MALAT1通过SF2/ASF调控癌基因RON剪接促进膀胱癌演进的机制研究
  • 批准号：
    81172431
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    60.0万元
  • 批准年份：
    2011
  • 负责人：
    黄健
  • 依托单位：
    中山大学
剪接因子SF2在儿童白血病中的表达及作用机制研究
  • 批准号：
    30973239
  • 项目类别：
    面上项目
  • 资助金额：
    8.0万元
  • 批准年份：
    2009
  • 负责人：
    郑胡镛
  • 依托单位：
    首都医科大学