内皮型NO合成酵素遺伝子-786C変異へ結合するサプレッサーの機能解析

内皮NO合酶基因-786C突变抑制子结合的功能分析

• 批准号: 11158209
• 负责人: 斎藤 能彦
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11158209/
• 关键词: eNOS遺伝子; 遺伝子多型; 転写抑制因子; RPA1

冠攣縮性狭心症と有意に関連しているeNOS遺伝子5'転写調節領域のT-786C変異の機能解析を行った。T-786C変異はルシフェラーゼリポーター遺伝子に結合してHUVECさにトランスフェクションしルシフェラーゼ活性を測定した、この変異により転写活性が30%低下した。-786C変異型DNAへの結合活性を指標にこの変異に結合する転写因子をHela細胞核蛋白質300mgより精製した。アミノ酸配列を決定した結果この蛋白質はreplication proteinA1と同一の蛋白質であった。-786C変異型DNAをプローブにしたゲルシフトアッセイでは、GST融合型のGSTに対する抗体でスーパーシフトした。RPA1cDNAを発現ヴェクターに挿入しCOS1細胞にeNOS変異型遺伝子リポーター遺伝子と共発現させるとRPA1の過剰発現によりリポーター活性はより低下した。また、RPA1のアンチセンスoligonucleotideをやはりリポーター遺伝子と共にHUVECに共発現させるとアンチセンスoligonucleotideはリポーター活性の低下を有意に抑制した。以上のことからRPA1がサプレッサーとしてT-786C変異型遺伝子にサプレッサーとして働いて変異型遺伝子の転写活性を抑制していることが証明された。また、イントロン4にはVNTR変異が以前より報告されており、この変異と虚血性心疾患の関連が報告されていたがこの変異とT-786C変異は連鎖不均衡にあることを日本人の症例で確認した。このことによりイントロン4のVNTR変異の機能的な原因LociはT-786C変異であることが示唆された。

ENOS gene 5'-cell regulatory domain T-786C differential function analysis T-786C is a 30% lower than HUVEC. 786C heteromorphic DNA binding activity indicator for different binding factors Hela nuclear protein 300mg purified The protein replication is the same as the protein replication. 786C heteromorphic DNA fragments are isolated from GST fusion fragments. RPA 1 cDNA is expressed in COS1 cells, and eNOS variant gene is expressed in COS 1 cells. RPA1 oligonucleotides are intentionally suppressed by the reduction of their activity in HUVEC. The above results demonstrate that RPA1 can be used to inhibit the activity of T-786C heteromorphic DNA. The relationship between VNTR and T-786C was reported and confirmed. The reason why the VNTR function of the T-786C is different

项目成果

N.Tamura: "Cardiac fibrosis in mice lacking brain natriuretic peptide"Proc.Natl.Acad.Sci.USA. (in press). (2000)

N.Tamura：“缺乏脑钠尿肽的小鼠的心脏纤维化”Proc.Natl.Acad.Sci.USA。

I..Hamanaka: "Effects of Cardiotrophin-1 on Hemodynamics and Endocrine Function of the Heart"Am.J.Physiol.. (in press). (2000)

I..Hamanaka：“Cardiotropin-1 对心脏血流动力学和内分泌功能的影响”Am.J.Physiol..（出版中）。

K.Kuwahara: "Involvement of cardiotrophin-1 in cardiac myocyte-nonmyocyte interactions during hypertrophy of rat cardiac myocytes in vitro"Circulation. 100・10. 1116-1124 (1999)

K.桑原：“体外大鼠心肌细胞肥大过程中心肌细胞与非心肌细胞相互作用的参与”循环100・10。

E. Ogawa: "Outside-in Signaling of Fibronectin Stimulates Cardiomyocyte Hyper-trophy in Cultured Neonatal Rat Ventricular Myocytes"J. Mol. Cell. Cardiaol. (in press). (2000)

E. Okawa：“纤连蛋白的由外向内信号刺激培养的新生大鼠心室肌细胞中的心肌细胞肥大”J。

M.Nakayama: "T-786 C mutation in the endothelial nitric oxide synthase gene is associated with coronary spasm : reduction in promoter activity"Circulation. 99・22. 2864-2870 (1999)

M.Nakayama：“内皮一氧化氮合酶基因中的 T-786 C 突变与冠状动脉痉挛相关：启动子活性降低”循环 99·22。