RPA1による-786C変異型eNOS遺伝子転写抑制機構の解明

RPA1阐明-786C突变型eNOS基因转录抑制机制

• 批准号: 12032209
• 负责人: 斎藤 能彦
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12032209/
• 关键词: eNOS遺伝子; 遺伝子多型; サプレッサー; 冠攣縮性狭心症; RPA1; NOx

我々は、熊本大学循環器内科との共同研究で冠攣縮性狭心症の病因にeNOS遺伝子異常が深く関与していることを報告してきた。冠攣縮性狭心症と強い関連を示す(Odds ratio 5.7)eNOS遺伝子5'転写調節領域のT-786C変異の機能解析を行った結果、変異型遺伝子にサプレッサーが結合し、eNOS転写活性を低下させている実験結果を得た(Circulation 1999)。更にこのT-786C変異に結合する蛋白質を精製した結果、目的の蛋白質は、ヒトではDNA修復に与るreplication protein A1(RPA1)と同一蛋白質であった(Human Molecular Genetics2000)。T-786C変異がeNOS遺伝子発現低下に関係していることを、in vitro in vivoの双方で検討し、以下の実績を得た。1.T-786C変異配列のサプレッサーエレメントとしてのin vitroでの証明eNOS遺伝子5′転写調節領域1.6kbpをルシフェラーゼリポーター遺伝子に結合し、T-786C変異部位を中心に11bp欠失させたところ、ルシフェラーゼ活性は野生型のレベルまで回復した。またSV40の5′基本転写調節領域を結合させたリポーター遺伝子に、T-786C変異部位を中心にした20bpのオリゴヌクレオチドを3つタンデムに結合させるとそのリポーター活性は低下した。これらのことからT-786C変異配列がサプレッサー配列であることがわかった。また、RPA1の翻訳開始点を含む領域のアンチセンスオリゴヌクレオチドをHUVECにトランスフェクションするとeNOS遺伝子の転写活性を抑制した。2.T-786C変異配列のサプレッサーエレメントとしてのin vivoでの証明-786C変異型胎盤と野生型胎盤を用いてeNOS遺伝子発現とRPA1の蛋白発現を検討すると、両遺伝子型にてRPA1の発現量には差がなかったが、eNOSmRNA発現は変異型胎盤にて有意に低下していた。また、血中NOx濃度を両遺伝子型で検討すると変異型の症例の方が血中NOx濃度が有意に低下していた。

I 々 は circulator, kumamoto university medical と の で crown contracture sexual division of common research の causes に eNOS heritage 伝 child abnormal が deep く masato and し て い る こ と を report し て き た. Strong sexual division crown contracture と い masato even を shown す (Odds thewire 5.7) traces of eNOS 伝 son 5 'planning, regulating field の T - 786 - c - different の line function analytical を っ た results, - but 伝 alien に サ プ レ ッ サ ー が し, eNOS activity planning write low を さ せ て い る be the result of 験 を た (Circulation (1999). More に こ の T - 786 - c - different に combining す る protein を refined し た results, purpose の protein は, ヒ ト で は DNA repair に and る replication protein A1 (RPA1) と the same protein で あ っ た (Human Molecular Genetics2000). T - 786 - c - different が eNOS posthumous son 伝 発 now low に masato is し て い る こ と を, in vitro, in vivo の both で beg し 検, the following の be performance を た. 1.T-786C variant configuration サプレッサ サプレッサ エレメ トと トと て て in Traces of vitro で の prove eNOS 伝 son 5 'planning, regulating field 1.6 KBP を ル シ フ ェ ラ ー ゼ リ ポ ー タ ー heritage 伝 に combining し, T - 786 - c - different parts を center に lost 11 bp owe さ せ た と こ ろ, ル シ フ ェ ラ ー ゼ active は wild-type の レ ベ ル ま で reply し た. ま た SV40 の 5 'basic planning, regulating field を combining さ せ た リ ポ ー タ ー heritage 伝 に, T - 786 - c - different parts を center に し た 20 bp の オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を 3 つ タ ン デ ム に combining さ せ る と そ の リ ポ ー タ ー active low は し た. The T-786C variant configuration がサプレッサ れら configuration である とがわ とがわ とがわ った った. ま た, RPA1 の 訳 start point を containing む field の ア ン チ セ ン ス オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド を HUVEC に ト ラ ン ス フ ェ ク シ ョ ン す る と eNOS heritage 伝 son の planning write inhibition し を た. 2.T-786C variant configuration サプレッサ サプレッサ エレメ トと トと て て in Vivo で の proof - 786 - c - abnormal placenta と wild-type placenta を with い て eNOS posthumous son 伝 発 now と RPA1 の protein 発 を now beg す 検 る と type, struck but 伝 に て RPA1 の 発 now quantity に は poor が な か っ た が, eNOSmRNA 発 は now - different placenta に て deliberately low に し て い た. ま た and NOx concentrations in the blood を struck heritage 伝 sub-type で す 検 please る と cases - alien の の party が blood low NOx concentration が intentionally に し て い た.

项目成果

I.Hamanaka: "Induction of JAB/SOCS-1/SSI-1 and CIS3/SOCS-3/SSI-3 Is Involved in gp130 Resistance in Cardiovascular System in Rat Treated with Cardiotrophin-l (CT-l) in vivo."Circ. Res.. (In Press). (2001)

I.Hamanaka：“JAB/SOCS-1/SSI-1 和 CIS3/SOCS-3/SSI-3 的诱导参与体内用心肌营养蛋白-1 (CT-1) 治疗的大鼠心血管系统中的 gp130 抵抗。”

K. Kuwahara: "Neuron-Restrictive Silencer Element/Neuron-Restrictive Silencer Factor System Regulates Basal-and Endothelin-1-Inducible Atrial Natriuretic Peptide Gene Expression in Ventricular Myocytes"Mol Cell Biol.. 21. 2085-2097 (2001)

K. Kuwahara：“神经元限制性沉默元件/神经元限制性沉默因子系统调节心室肌细胞中的基础和内皮素-1诱导的心房钠尿肽基因表达”Mol Cell Biol.. 21. 2085-2097 (2001)

Y.Mizuno: "Aldosterone Production is Activated in the Failing Ventricles in Humans."Circulation.. 103. 72-77 (2001)

Y.Mizuno：“醛固酮的产生在人类衰竭的心室中被激活。”循环.. 103. 72-77 (2001)

K.Kuwahara: "Cardiotorphin-l phosphorylates Akt and BAD, and prolongs cell survival via a PI3K-dependent pathway in cardiac myocytes."J.Mol.Cell.Cardiol.. 32. 1385-1394 (2000)

K.Kuwahara：“Cardiotorphin-l 磷酸化 Akt 和 BAD，并通过心肌细胞中的 PI3K 依赖性途径延长细胞存活。”J.Mol.Cell.Cardiol.. 32. 1385-1394 (2000)

E.Ogawa: "Outside-in Signaling of Fibronectin Stimulates Cardiomyocyte Hypertrophy in Cultured Neonatal Rat Ventricular Myocytes"J.Mol.Cell Cardiol.. 32. 765-776 (2000)

E.Okawa：“纤连蛋白的由外向内信号刺激培养的新生大鼠心室肌细胞中的心肌细胞肥大”J.Mol.Cell Cardiol.. 32. 765-776 (2000)