糖ヌクレオチド輸送体を介する糖鎖リモデリングの基礎研究

糖核苷酸转运蛋白介导的聚糖重塑的基础研究

• 批准号: 11159220
• 负责人: 川喜田 正夫
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11159220/
• 关键词: 糖ヌクレオチド輸送体; 糖鎖生物学; 糖鎖リモデリング; UDP-N-アセチルガラクトサミン; UDP-グルクロン酸

DNA配列データベースの中に見いだされたUDP-ガラクトース輸送体関連ヒト遺伝子(hUGT rel7)の暗号配列領域を確定し、その産物を出芽酵母細胞のミクロソーム膜中で発現させることに成功した。酵母ミクロソームにはGDP-マンノース輸送体以外の糖ヌクレオチド輸送体が存在しない事実を利用して各種の糖ヌクレオチドに対する輸送活性を検討した結果、hUGT rel7タンパク質がUDP-N-アセチルガラクトサミンおよびUDP-グルクロン酸の両者を輸送する二重特異的輸送体であることが明らかになった。さらに、C-末端にHA-tagを付加したhUGT rel7 cDNAをCHO細胞中で発現させ、輸送体タンパク質の細胞内局在性について検討した結果、この輸送体は小胞体のマーカータンパク質Erp57と同一の領域に局在する小胞体タンパク質であることが明らかになった。糖ヌクレオチド輸送体の中で、小胞体に局在する分子種、2種類の基質を輸送する分子種が見いだされたのは、ともにhUGT rel7が最初の例であり、本年度の成果はその意味できわめて注目すべきものである。さらに、hUGT rel7 mRNAは全長7kbで3'-非翻訳領域がきわめて長く、その部分にmRNA不安定化配列であるAUUUAモチーフが多数存在することも明らかになった。基質特異性から見て、この輸送体がグルクロン酸抱合あるいはプロテオグリカンの合成に関与しているかどうか、また、それに関連してどのような制御を受けているかという点は、基質の供給を介する糖鎖合成および糖鎖特異性の制御という観点から興味深い課題であると考えられる。

DNA match column デ ー タ ベ ー ス の に seen い だ さ れ た UDP - ガ ラ ク ト ー ス conveying body masato even ヒ ト heritage 伝 child (hUGT rel7) の sign with column field を し, そ の product を budding yeast cell の ミ ク ロ ソ ー ム membrane in で 発 now さ せ る こ と に successful し た. Yeast ミ ク ロ ソ ー ム に は GDP - マ ン ノ ー ス conveying body outside の sugar ヌ ク レ オ チ ド conveying body exist が し な い things be を using し て various の sugar ヌ ク レ オ チ ド に す seaborne る conveying active を beg し 検, hUGT た results Rel7 タ ン パ ク qualitative が UDP - N - ア セ チ ル ガ ラ ク ト サ ミ ン お よ び UDP - グ ル ク ロ ン acid の struck the を conveying す る double specific transport body で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. Youdaoplaceholder0, にHA-tagを at the c-end, plus <s:1> たhUGT rel7 CDNA を CHO cells で 発 now さ せ, conveying タ ン パ ク qualitative の bureau in the cell in the sexual に つ い て beg し 検 た results, こ の conveying body は small cell body の マ ー カ ー タ ン パ ク qualitative Erp57 と に bureau the same の field in す る small cell body タ ン パ ク qualitative で あ る こ と が Ming ら か に な っ た. Sugar ヌ ク レ オ チ ド conveying body の で, small cell body に bureau in す る molecular species, 2 species の matrix を conveying す る molecules of が see い だ さ れ た の は, と も に hUGT rel7 が の patients initially で あ り, this year's の は そ の mean で き わ め て attention す べ き も の で あ る. さ ら に, hUGT rel7 mRNA は length 7 KB で 3 '- not turn 訳 field が き わ め て く, そ の part に mRNA is not stabilization with column で あ る AUUUA モ チ ー フ が most existing す る こ と も Ming ら か に な っ た. Substrate specificity か ら て, こ の conveying body が グ ル ク ロ ン acid looping あ る い は プ ロ テ オ グ リ カ ン の synthetic に masato and し て い る か ど う か, ま た, そ れ に masato even し て ど の よ う な suppression を by け て い る か と い の supply を う は, matrix interface す る sugar lock synthetic お よ び sugar lock specificity の suppression と い う 観 point か ら tumblers deep い subject で あ Youdaoplaceholder0 tests えられる.

项目成果

Ishida, N.et al.: "Indispensability of transmembrane domains of UDP-galactose transporter as revealed by analysis of genetic defects in UDP-galactose transporter-deficient murine Had-1 mutant cell lines and construction of deletion mutants"J. Biochem.. 12

Ishida, N.等人：“通过分析 UDP-半乳糖转运蛋白缺陷型鼠 Had-1 突变细胞系的遗传缺陷和构建缺失突变体，揭示了 UDP-半乳糖转运蛋白跨膜结构域的必要性”J.

Aoki, K.et al.: "Expression and activity of chimeric molecules between human UDP-galactose transporter and CMP-sialic acid transpoeter"J. Biochem.. 126. 940-950 (1999)

Aoki, K.et al.：“人 UDP-半乳糖转运蛋白和 CMP-唾液酸转运蛋白之间嵌合分子的表达和活性”J.

Segawa, H.et al.: "Schizosaccharomyces pombe UDP-galactose transporter : identification of its functional from through cDNA cloning and expression in mammalian cells"FEBS Lett.. 451. 295-298 (1999)

Sekawa，H.等人：“粟酒裂殖酵母 UDP-半乳糖转运蛋白：通过 cDNA 克隆和在哺乳动物细胞中表达鉴定其功能”FEBS Lett.. 451. 295-298 (1999)

Yamamoto, Y. and Kawakita, M.: "Chemical modification of an arginine residue in the ATP-binding site of Ca^<2+>-transporting ATPase of sarcoplasmic reticulum by phenylglyoxal"Mol. Cell Biochem.. 190. 169-177 (1999)

Yamamoto, Y. 和 Kawakita, M.：“通过苯基乙二醛对肌浆网 Ca^2 转运 ATP 酶的 ATP 结合位点中的精氨酸残基进行化学修饰”Mol。

Kainuma, M.et al.: "Coexpression of α1, 2 galactosyltransferse and UDP-galactose transporter efficiently galactosylates N- and O-glycans in Saccharomyces cerevisiae"Glycobiology. 9. 133-141 (1999)

Kainuma, M. 等人：“α1, 2 半乳糖基转移酶和 UDP-半乳糖转运蛋白的共表达可有效地在酿酒酵母中半乳糖基化 N-和 O-聚糖”，《糖生物学》9. 133-141 (1999)。