カルシウムイオンの細胞内動態の制御

钙离子细胞内动力学的控制

• 批准号: 60223012
• 负责人: 川喜田 正夫
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1985
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1985 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-60223012/
• 关键词: カルシウム; 筋小胞体; 能動輸送; ATPアーゼ; トリフルオペラジン

骨格筋の刺戟応答時における細胞内【Ca^(2+)】イオン濃度の動態は、筋小胞体からの【Ca^(2+)】遊離と、能動輸送による筋小胞体内腔への再回収に二つの反応過程の速度によって規定されている。【Ca^(2+)】イオンの回収過程における【Ca^(2+)】動態の制御の可能性を検証し、その実態を明らかにするためには、能動輸送の担い手である【Ca^(2+)】輸送ATPaseの活性制御機構を明らかにすることが重要である。本研究においては特に、【Ca^(2+)】輸送部位の構造ならびに【Ca^(2+)】親和性の変化による輸送活性の制御に関連するいくつかの問題点について検討を加え、以下の結果を得た。1.ATPaseの【Ca^(2+)】結合部位の構造を明らかにするために、ATPaseのトリプシン限定分解を行い、限定分解断片複合体の反応特性と【Ca^(2+)】依存性について研究した。【A_1】+【A_2】+B複合体から【A_(16)】+B複合体への開裂(【A_1】→【A_(16)】ならびに【A_2】の消失)に伴ってATPaseは失活した。しかしE-P形成活性は残存し、しかもこの反応は【10^(-6)】〜【10^(-5)】Mの【Ca^(2+)】で活性化された。この結果は【A_(16)】+B複合体中においても【Ca^(2+)】結合部位の構造がよく保存されていることを示し、この両断片が【Ca^(2+)】結合反応にも寄与していることを示唆するものと考えられる。 2.筋小胞体の【Ca^(2+)】輸送及びATPase活性は、カルシウム拮抗剤トリフルオペラジン(TFP)によって強く阻害された。15μM【Ca^(2+)】においてATPase活性に対するTFPのKiは約80μMであったが、この阻害は【Ca^(2+)】と拮抗的であることが示唆された。3.筋小胞体膜をTriton X-100で可溶化後、ATPaseを精製し、これを膜小胞に再構成した。TFPはこの標品のATPase活性を上記小胞体膜の場合と同様に強く阻害し、また精製ATPaseに対する【Ca^(2+)】の結合を強く阻害した。精製ATPase標品中には、さきにCarafoliらがTFP感受性賦与因子と考えた。いわゆる53K糖タンパク質はほとんど存在せず、ATPaseタンパク質自体がTFP感受性を示し、TFPによって【Ca^(2+)】親和性の調節を受けることが強く示唆された。

[Ca^(2+)] Dynamic concentration of the bone in the bone and tendon cells, [Ca^(2+) in the cell body [Ca^(2)] +)】The free and active transport of the tendons into the inner cavity of the small cells and the recovery and recovery of the reaction process are determined by the speed and speed of the reaction. 【Ca^(2+)】The recovery process of イオンのにおける【Ca^(2+)】The possibility of dynamic control を検证し、その実state を明らかにするIt is an active control mechanism that transports ATPase. This study focuses on the structure of the transport site of [Ca^(2+)] and the affinity of [Ca^(2+)]. The following results have been obtained by changing the problem of transporting active substances and controlling the problem. 1. ATPase【Ca^(2+)】The structure of the binding site is clear and the structure of the ATPase binding site is clear. Research on the limited decomposition of シン and the dependence of the limited decomposition fragment complex on [Ca^(2+)]. 【A_1】+【A_2】+B complex から【A_(16)】+B complex への crack (【A_1】→【A_(16)】ならびに【A_2】のdisappear) に companion ってATPase は inactivation した.しかしE-P forms active は remaining し, しかもこのreaction 応は【10^(-6)】～【10^(-5)】M の【Ca^(2+)】でactivated された.このRESULTは【A_(16)】+B complex においても【Ca^(2+)】The structure of the binding site is saved by されていることをshows し, この両片が【Ca^(2+)】combines the anti-応にも发 and していることをshows 唆するものと卡えられる. 2. The transport of [Ca^(2+)] in tendon cells and the activity of ATPase are strong and strong, and the antagonist of カルシウムつトリフルオペラジン (TFP) is strong and strong in blocking された. 15μM【Ca^(2+)】においてATPase activityに対するTFPのKiはapproximately 8 0μM であったが, このblocking は【Ca^(2+)】 and antagonizing であることがshows instigation された. 3. After solubilizing the muscle cell body membrane with Triton X-100 and purifying it with ATPase, the muscle cell body membrane is reconstituted. The ATPase activity of the standard product of TFP is the same as that of the small cell body membrane, and the purified ATPase is strong and blocked by binding [Ca^(2+)]. Among the purified ATPase standard products, the TFP sensitivity-conferring factors of には and さきにCarafoli are tested. TFP feeling Sex を Show し, TFP によって [Ca^ (2+)] Affinity の Regulation を Receive け る こ と が STRONG く Show instigation さ れ た.

项目成果

Structure and Function of Sarcoplasmic Reticulum. .63 (1985)

肌浆网的结构和功能。