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神経特異的に発現する新規SRタンパク質、NSSR1および2の機能と生理的役割

神经元中特异表达的新型 SR 蛋白 NSSR1 和 2 的功能和生理作用

基本信息

批准号：
12029225
负责人：
塚原俊文
金额：
$ 1.41万
依托单位：
National Center of Neurology and Psychiatry
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

神経特異的に発現する新規スプライシング因子であるNSSR1および2は単一の遺伝子から選択的スプライシングの結果二種の産物が生成する。今年度はNSSR遺伝子の機能を明らかにするため、遺伝子破壊マウスの作成を試みた。まず、第一エクソンを含む約16kbのNSSRゲノム遺伝子を単離し、制限酵素マップを作成した。マップに基づき、第一エクソンとその周辺をNeoカセットと組み換えるターゲティングベクターを構築した。ターゲティングベクターをエレクト由ポレーション法によってES細胞に導入し、遺伝子が組み換えられた細胞を選択した。組み換えES細胞をブラストサイトにマイクロインジェクションすることによってマウスを創生した。これまで、二回試みそれぞれ90%および80%のキメラを得たが残念ながら一カ月程度で死亡してしまったため、遺伝子破壊マウスの作成には至っていない。現在、3回目のインジェクションを行っている。一方、神経でのスプライシング機構におけるNSSR遺伝子の役割を明らかにするため、NSSR1あるいは2に結合するタンパク質の検索を行う必要がある。結合タンパク質の検索は通常、酵母ツーハイブリッドシステムを利用するが、我々は基質となるRNA存在下でのみNSSRに結合するタンパク質を検索するため、スリーハイブリッドシステムによる遺伝子スクリーニングを試みた。これは、基質となるミニジーンを酵母に導入し、基質存在下でツーハイブリッドを行うものである。システムの準備を完了し、現在はスクリーニングを開始したばかりであるが、幾つかのポジティブクローンを得ており、今後の解析が待たれる。

Neuro-specific development of the new system factors NSSRs 1 and 2 are generated as a result of the selection of the system components. This year, the function of the NSSR gene was clarified, and the gene was tested. The first NSSR sequence contains about 16kb of DNA and is composed of DNA fragments and restriction enzymes. The first one is called the circle. The second one is called the circle. The first step is to introduce ES cells into the system and select ES cells. The first step is to create a new cell. 90% and 80% of the total number of people who died in the first half of the year. Now, 3 times the page, the page, the page. NSSR1, NSSR2, NSSR3, NSSR4, NSSR5, NSSR6, NSSR7, NSSR8, NSSR9, NSSR10, NSSR10, NSSR11, NSSR10, NSSR11, NSSR12, NSSR10, NSSR11, NSSR12, NSSR10, NSSR11, NSSR10, NSSR11, NSSR11, NSS In the presence of RNA, NSSR can be used to detect the presence of DNA. In the presence of substrate, yeast is introduced into the cell. The preparation of the list is complete, and now it is ready to be analyzed.