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Der Austausch von Nucleobasen durch Fluorophorsysteme. Parallele Synthese und biophysikalische Untersuchung intern fluoreszenzmarkierter Peptidnucleinsäuren

通过荧光团系统进行核碱基交换。

基本信息

批准号：
5299942
负责人：
Professor Dr. Oliver Seitz
金额：
--
依托单位：
Institut für Chemie
依托单位国家：
德国
项目类别：
Research Grants
财政年份：
2000
资助国家：
德国
起止时间：
1999-12-31 至 2002-12-31
项目状态：
已结题

来源：
https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5299942?language=en
关键词：
Der Austausch von Nucleobasen durch

项目摘要

Die Bindung zweier komplementärer Nucleinsäuren ist die Grundlage vieler molekularbiologischer Verfahren. Zur DNA-Detektion sollen DNA-Analoga synthetisiert werden, bei denen ein Intercalatorfarbstoff als "Basensurrogat" eine natürliche Nucleobase ersetzt. Als molekulares Gerüst werden Peptidnucleinsäuren verwendet, die mit extrem hoher Affinität Ziel-DNA binden. Eine rasche und parallele Synthese der intern markierten PNA-Fluorophor-Konjugate wird ermöglicht, in dem alle Schritte inklusive der Synthese der "Fluorophor-Monomere" an der festen Phase erfolgen. Nach Bindung an DNA ist der Fluorophor im Inneren eines PNA-DNA-Duplex positioniert und reagiert auf Strukturänderungen in seiner Umgebung. Die Hybridisierung mit einem komplementären DNA-Strang führt zu einer Intensivierung der Interkalatorfluoreszenz. Hingegen wird bei der erzwungenen Interkalation neben fehlgepaarten Basen eine Erniedrigung der Fluoreszenzintensität erwartet. Molekülrotationen um die PNA-FluorophorBindung werden die Fluoreszenzanisotropie im Vergleich zu perfekt komplementären Duplices erniedrigen. Diese Techniken sollten eine einfache Detektion von Einzelbasen-Polymorphismen (SNP's) ermöglichen. Deren Aufspürung ist für das grundlegende Verständnis der Erbkrankheiten von zentraler Bedeutung.

结合两种补充的核蛋白是基础分子生物学的一部分。DNA检测需要DNA类似物合成韦尔登，因为插入物是天然核碱基的“替代物”。所有的分子都可以韦尔登核结合，它们具有极高的亲和力和DNA结合。本文介绍了一种新的标记PNA-荧光体-偶联物的平行合成方法，即荧光体-单体的合成和固定相的合成。DNA结合后，荧光团在PNA-DNA-Duplex内定位并在结构上反应。Die Hybridisierung mit einem komplementären DNA-Strang führt zu einer Intensivierung der Interkalatorfluoresenz. Hingegen wird bei der erzwungenen Interkalation neben fehlgepaarten Basen eine Erniedrigung der Fluorzenzintensität erwartet。分子旋转使PNA-荧光素结合韦尔登在Vergleich中产生各向异性，从而使双拷贝更加完美。该技术解决了一个单核苷酸多态性（SNP）的检测问题。Deren Aufspürung ist für das grundesterion de Verständnis der Erbkrankheiten von zentraler Bedeutung.