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Der Austausch von Nucleobasen durch Fluorophorsysteme. Parallele Synthese und biophysikalische Untersuchung intern fluoreszenzmarkierter Peptidnucleinsäuren

通过荧光团系统进行核碱基交换。

基本信息

批准号：
5299942
负责人：
Professor Dr. Oliver Seitz
金额：
--
依托单位：
Institut für Chemie
依托单位国家：
德国
项目类别：
Research Grants
财政年份：
2000
资助国家：
德国
起止时间：
1999-12-31 至 2002-12-31
项目状态：
已结题

来源：
https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5299942?language=en
关键词：
Der Austausch von Nucleobasen durch

项目摘要

Die Bindung zweier komplementärer Nucleinsäuren ist die Grundlage vieler molekularbiologischer Verfahren. Zur DNA-Detektion sollen DNA-Analoga synthetisiert werden, bei denen ein Intercalatorfarbstoff als "Basensurrogat" eine natürliche Nucleobase ersetzt. Als molekulares Gerüst werden Peptidnucleinsäuren verwendet, die mit extrem hoher Affinität Ziel-DNA binden. Eine rasche und parallele Synthese der intern markierten PNA-Fluorophor-Konjugate wird ermöglicht, in dem alle Schritte inklusive der Synthese der "Fluorophor-Monomere" an der festen Phase erfolgen. Nach Bindung an DNA ist der Fluorophor im Inneren eines PNA-DNA-Duplex positioniert und reagiert auf Strukturänderungen in seiner Umgebung. Die Hybridisierung mit einem komplementären DNA-Strang führt zu einer Intensivierung der Interkalatorfluoreszenz. Hingegen wird bei der erzwungenen Interkalation neben fehlgepaarten Basen eine Erniedrigung der Fluoreszenzintensität erwartet. Molekülrotationen um die PNA-FluorophorBindung werden die Fluoreszenzanisotropie im Vergleich zu perfekt komplementären Duplices erniedrigen. Diese Techniken sollten eine einfache Detektion von Einzelbasen-Polymorphismen (SNP's) ermöglichen. Deren Aufspürung ist für das grundlegende Verständnis der Erbkrankheiten von zentraler Bedeutung.

核的结合是分子生物学的基础。 DNA 检测所涉及的 DNA 类似物合成方法，是在 Intercalatorfarbstoff 中作为“Basensurrogat” eine natürliche Nucleobase ersetzt 进行的。 Als molecularulares Gerüst werden Peptidnucleinsäuren verwendet, die mit extrem hoher Affinität Ziel-DNA Binden。 PNA-荧光团-共轭物的内部标记和平行合成，在所有 Schritte 中包括“荧光团单体”的合成和 der festen Phase erfolgen。 Nach Bindung 是 DNA 的内部荧光团，位于 PNA-DNA-Duplex 的内部位置并在围网中的 Strukturänderungen 中起作用。 DNA-Strang 与 Interkalator Flueszenz 的强化杂交。重要的是，Interkalation 必须是荧光强度的基础。分子旋转和 PNA-荧光团结合是荧光各向同性的，以实现完美的复制。 Diese Techniken sollten eine einfache Detektion von Einzelbasen-Polymorphismen (SNP's) ermöglichen。 Deren Aufspürung ist für das grundlegende Verständnis der Erbkrankheiten von zentraler Bedeutung。