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Selbstreinigende Synthese von Peptidthioestern zum Aufbau von Proteindomänen auf Arrays und auf Beads

用于在阵列和珠子上构建蛋白质结构域的肽硫酯的自清洁合成

基本信息

批准号：
21521648
负责人：
Professor Dr. Oliver Seitz
金额：
--
依托单位：
Institut für Chemie
依托单位国家：
德国
项目类别：
Research Grants
财政年份：
2005
资助国家：
德国
起止时间：
2004-12-31 至 2012-12-31
项目状态：
已结题

来源：
https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/21521648?language=en
关键词：
Selbstreinigende Synthese von Peptidthioestern zum

项目摘要

Die Festphasensynthese von Peptidthioestern gelingt gegenwärtig nicht mit den selben Ausbeuten und Reinheiten wie für Peptidsäuren und -amide gewohnt. Aus diesem Grund wurde bislang bei der chemischen Totalsynthese von Proteindomänen-Arrays, die über native chemische Ligation hergestellt werden, lediglich der C-terminale Teil variiert, während die Sequenz des N-terminalen Fragments (Thioester) beibehalten werden musste. In den Vorarbeiten wurde eine leistungsfähige Methode zur vollautomatischen Synthese von Peptidthioestern etabliert, die unter Ausnutzung eines „Selbstreinigungseffekts" Rohprodukte hoher Reinheit liefert. Diese können direkt ohne HPLC-Reinigung in der nativen chemischen Ligation eingesetzt werden. Die Peptidthioester werden die chemische Synthese eines SH3-Domänen-Arrays ermöglichen. Der Array wird zwei verschiedene, wohlcharakterisierte SH3-Domänen des Hefeproteoms präsentieren. Durch die Entwicklung eines Cystein-Scans wird beispielhaft untersucht, an welchen Stellen das für die native chemische Ligation benötigte Cystein eingefügt werden kann, ohne dass Kupplungsausbeuten und die Funktion der Proteindomäne leiden. Geträgerte Peptidthioester werden in einer On Bead Ligation verwendet. Hier wird die Ablösung vom Syntheseharz reine Proteindomänen liefern, da lediglich das Verknüpfungsprodukt an der Festphase gebildet wird, während Nebenprodukte und Abbruchsequenzen in Lösung verbleiben.

肽硫代磷酸酯的快速合成不像肽和酰胺那样需要自身的Ausbeuten和Reinheiten。在蛋白质阵列的化学全合成中，我们首先要进行天然的化学连接韦尔登，改变C-末端的结构，然后进行N-末端片段（硫酯）的序列测定，韦尔登必须进行。在该Vorarbeiten wurde一个leistungsfähige方法zur vollautomatischen合成peptidthiophthietabliert，die unter Ausnutzung eines“Selbstreinigungseffekts”Rohprodukte hoher Reinheit liefert。该方法直接在天然化学连接韦尔登中进行高效液相色谱法测定。肽硫酯韦尔登由化学合成的SH 3-结构域-阵列。该阵列将检测两种蛋白质，其特征是SH 3-Domänen des Hefeproteoms präsentieren。在半胱氨酸扫描的发展过程中，半胱氨酸的天然化学连接韦尔登的蛋白质结构和功能发生变化。Geträgerte肽硫酯韦尔登in einer On Bead Ligation verwendet.在这里，我们将从蛋白质合成中分离出来，并在节日期间生产出产品，然后将产品和生产过程进行简化。