電気穿孔法を用いる尿路性器癌の遺伝子治療の開発研究

电穿孔泌尿生殖道癌症基因治疗的研究与开发

• 批准号: 11877276
• 负责人: 穂坂 正彦
• 金额: $ 0.45万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 2000
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11877276/
• 关键词: 遺伝子治療; 電気穿孔法; 前立腺癌; P53遺伝子; PS3遺伝子

本研究では萌芽的な研究としてこの電気穿孔法を、まず動物レベルでの遺伝子導入応用を試み、その基礎的検討を行う。さらに、ヒト遺伝子治療の新しい手段の確立を目指した種々の条件を探る。昨年度までの成果として、ヌードマウス皮下にP53遺伝子の欠損するヒト前立腺癌細胞PC-3を移植し、腫瘍を形成させ、これを用いIn Vivoでの遺伝子導入を試み、その結果、電極間距離1cm、電圧1kv/cmの条件で効率よく腫瘍内にDNAが導入され、遺伝子発現がもたらされることが明らかとなった。また、正常(野生型)P53遺伝子を組み込んだDNAを調整し、上記の条件で電気穿孔法により遺伝子導入を行ったところ、腫瘍の縮小効果が認められた。本年度の成果として1.さらに変異型のP53遺伝子を組み込んだDNAを調整し、変異型のP53遺伝子と、正常P53遺伝子をそれぞれ上記の方法と条件で遺伝子導入を試みた。その結果、正常P53遺伝子を導入した腫瘍にのみ腫瘍の縮小効果が認められた。このことは、腫瘍縮小効果がP53遺伝子の働きによるものであることを示したものと考えられる。2.また、上記の遺伝子を導入した腫瘍細胞より、DNAとRNAを抽出し、P53遺伝子の組み込み状態と遺伝子発現状況をSouthern法とNorthern法にて調べ、確かにP53遺伝子が細胞に導入され、遺伝子発現をしていることを確認した。3.上記1.2.より電気穿孔法を用いる遺伝子治療は、尿路性器系癌の遺伝子治療に有望であることが示唆され、今後の展開が期待される。

This study is a preliminary study of electroporation, an experimental study of gene transfer in animals, and a preliminary study of the basis of this study. To explore the conditions for the establishment of new methods for the treatment of breast cancer. In the past year, the results of gene transfer in Vivo were as follows: 1 cm distance between electrodes, 1kv/cm voltage, DNA transfer in tumor, gene expression in tumor. P53 gene expression was detected by DNA sequencing, electroporation and DNA sequencing. This year's results include: 1. DNA modification of heteromorphic P53 genes, DNA modification of normal P53 genes, DNA modification of heteromorphic P53 genes, DNA modification of normal P53 genes, DNA modification of heteromorphic P53 genes, DNA modification The results showed that normal P53 gene was introduced into the tumor and the tumor was reduced. This is the first time I've ever seen a woman. 2. DNA and RNA extraction, P53 gene organization and gene expression were confirmed by Southern and Northern methods. 3. 1.2. The use of electroporation in the treatment of urinary tract genital cancer is expected to be carried out in the future

项目成果

Miyamoto,H. et al.: "C-erbB-2 gene amplification as a prognostic marker in human bladde cancer"

宫本，H.