生体内電気穿孔法を用いた電気遺伝子療法の臨床応用へ向けた安全性に関する研究

体内电穿孔电基因疗法临床应用的安全性研究

• 批准号: 13218106
• 负责人: 生塩 之敬
• 金额: $ 2.62万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13218106/
• 关键词: 電気穿孔法; 遺伝子治療; グリオーマ; IL-12; MCP-1; Hsv-tk; DT-A; 臨床応用

我々は、プラスミドDNAを安全かつ有効的に細胞内に投与し発現させることによる遺伝子治療の方法として、生体内電気穿孔法を開発してきた。まず、投与するプラスミドDNAの濃度、電気穿孔器の電圧、パルスなど最適な条件を検討した。その後、腫瘍に対する治療実験を行った。マウス実験腫瘍を用い、いくつかのプラスミドDNAの有効性を比較検討し、有効なプラスミドDNAを選択した。抗腫瘍効果を期待できるいくつかの遺伝子を用いてそれぞれの遺伝子の有効性や問題点を検討した。今回の研究の目的は、抗腫瘍効果が確認できた条件で、正常組織での安全性を確認することであった。方法としては、腫瘍局所で免疫系を惹起させる遺伝子(IL-2,MCP-1)や、遺伝子が発現すること自体は細胞毒性を示さず、後に薬剤を投与したときに細胞毒性を示すいわゆる自殺遺伝子(ヘルペスウイルスサイミジンカイネース、ジフテリアトキシン)などの導入を試み、それぞれの遺伝子における腫瘍縮小効果と安全性を検討した。マウス実験腫瘍で、最も抗腫瘍効果が見られた条件で、病理学的には、HE染色や神経細胞のマーカーを用い、また行動学的にはモニタリングを行うという方法で安全性の検討を行った。この結果、抗腫瘍効果の見られた条件でも、正常神経細胞には特に異常は認められなかった。また、行動異常を示すマウスの出現はなかった。以上より動物実験では、我々が開発した電気穿孔法の安全性が確認された。今回の研究の成果に基づき、今後われわらが対象としているグリオーマの合理的な治療法として、電気穿孔法を使った脳腫瘍の遺伝子治療を確立していきたい。

We have developed a new method of gene therapy for the safe delivery of DNA into cells and its discovery in vivo. The optimum conditions for the detection, injection, DNA concentration, electroporation voltage and plasma concentration were discussed. After treatment, the patient will be treated. A comparative study of the effectiveness of DNA in the selection process. Anti-tumor effect is expected to be discussed in the middle of the study. The purpose of this study is to confirm the anti-tumor effect and the safety of normal tissues. Methods: To investigate the safety of suicide vectors (IL-2,MCP-1), induction of suicide vectors (IL-2,MCP-1), induction The results of this study include: Pathological analysis, HE staining, and evaluation of the safety of the tumor. The results, anti-tumor effect and abnormal recognition of normal neurons There is an abnormality in the movement. The safety of the electroporation method has been confirmed by the above animal tests. The results of this study are based on the establishment of a reasonable treatment method for breast cancer by electroporation.

项目成果

T.Goto: "Highly efficient electro-gene therapy of solid tumor by using an expression plasmid for the herpes simplex virus thymidine kinase"Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 97(1). 354-359 (2000)

T.Goto：“使用单纯疱疹病毒胸苷激酶表达质粒对实体瘤进行高效电基因疗法”美国国家科学院院刊。

K.Yoshizato: "Gene delivery with potimized electroporation parameters shows potential for treatment of gliomas"International Journal of Oncology. 16. 899-905 (2000)

K.Yoshizato：“利用优化的电穿孔参数进行基因传递显示出治疗神经胶质瘤的潜力”《国际肿瘤学杂志》。

T.Kino: "Identification of the cis-acting region in the NF2 gene promoter as a potential target for mutation and methylation-dependent silencing in schwannoma"Genes to cells. 6. 441-454 (2001)

T.Kino：“鉴定 NF2 基因启动子中的顺式作用区域作为神经鞘瘤中突变和甲基化依赖性沉默的潜在靶点”基因到细胞。

J.Kuratsu: "Trends in the incidence of primary intracranial tumors in Kumamoto, Japan"Int. J. Clin. Oncol.. 6. 183-191 (2001)

J.Kuratsu：“日本熊本市原发性颅内肿瘤的发病率趋势”Int。

K.Tada: "Analysis of loss of heterozygosity on chromosome 10 in patients with malignant astrocytic tumors"J.Neurosurg.. 95. 651-659 (2001)

K.Tada：“恶性星形细胞肿瘤患者 10 号染色体杂合性丢失的分析”J.Neurosurg.. 95. 651-659 (2001)