軟骨由来成長因子エコジェニン/CTGFを用いた歯周組織再建への試み

尝试使用软骨源性生长因子 Ecogenin/CTGF 重建牙周组织

基本信息

批准号：
11877324
负责人：
滝川正春
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1999
资助国家：
日本
起止时间：
1999 至 2000
项目状态：
已结题

项目摘要

1.歯根膜線維芽細胞株(MPL)にエコジェニン/CTGF作用させると、骨芽細胞と共通した分化マーカーであるI型コラーゲン、オステオカルシン、オステオポンチン、アルカリホスファターゼ等のmRNAの発現が亢進することは昨年度見いだしたが、本年度は新たに骨膜と歯根膜にのみ発現し、骨芽細胞に分化すると発現レベルが低下するペリオスチン遺伝子の発現がエコジェニン/CTGFの作用により亢進することを見い出した。すなわち、エコジェニン/CTGFは歯根膜線維芽細胞に対しては骨芽細胞にtransdiffeentiationさせるのではなく、歯根膜線維芽細胞としての分化機能の発現を特異的に誘導することが明らかとなった。2.TGF-β、BMPおよびIGF-Iにより骨芽細胞株Saos-2においてエコジェニン/CTGFの発現が亢進することが分った。また、歯根膜線維芽細胞MPLにおいてもTGF-βによりエコジェニン/CTGF発現の亢進を見い出した。3.β-ガラクトシダーゼ遺伝子をマーカーとして組み込んだ非増殖性アデノウイルスベクターを顎関節腔内に直接注入することにより、関節軟骨に遺伝子導入が可能であった。また、熱ショックタンパク70遺伝子をマーカーとして組み込んだ非増殖性アデノウイルスベクターを培養細胞に感染させ熱ショック刺激で発現することからこのベクターが有用であることを確認した。4.エコジェニン/CTGF遺伝子を非増殖性アデノウイルスベクターに組み込み、マウス骨芽細胞株MC3T3-E1細胞への遺伝子導入してエコジェニン/CTGFの産生能を検討した。その結果、MC3T3-E1細胞にはこの方法で効率よく遺伝子導入が可能で、また遺伝子発現も少なくとも7日間継続することがわかり、その有用性を確認できた。

1。我们发现去年，生态素/CTGF对牙周韧带成纤维细胞系（MPL）的作用增加了mRNA的表达，例如I型胶原蛋白，骨局钙钙蛋白，骨局局，骨蛋白，碱性磷酸酶，这是具有成骨细胞的常见分化标记。但是，今年我们发现，由于Ecogenin/ctGF的作用，增加了仅在骨膜和牙周韧带中新表达的骨膜素基因的表达会降低表达水平。换句话说，已经揭示了生态素/CTGF不会引起成骨细胞跨化牙周韧带成纤维细胞，而是特别诱导分化功能作为牙周韧带的表达。 2。发现TGF-β，BMP和IGF-I增强了Ecogenin/ctGF在成骨细胞细胞系SAOS-2中的表达。此外，在牙周韧带成纤维细胞MPL中，TGF-β也增加了TGF表达。 3。通过注射非增殖性腺病毒载体将基因转移到关节软骨中，该载体将β-半乳糖苷酶基因作为标记物直接进入颞下颌关节腔。此外，已经确认该载体很有用，因为将热休克蛋白70基因作为标记物的非增殖性腺病毒载体感染了培养的细胞并通过热休克刺激表达。 4。将Ecogenin/CTGF基因掺入非增殖性腺病毒载体中，并转染到小鼠成骨细胞系MC3T3-E1细胞中研究生态素/CTGF产生的能力。结果，发现使用该方法在MC3T3-E1细胞中可能进行基因转移，并且基因表达持续至少7天，从而证实了其有用性。