アデノウイルスベクターを用いた遺伝子導入法による顎関節症の遺伝子治療の試み

使用腺病毒载体的基因转移方法尝试对颞下颌关节疾病进行基因治疗

基本信息

批准号：
09877351
负责人：
滝川正春
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

1) 昨午度マーカー遺伝子としてβ-ガラクトシダーゼ遺伝子を組み込んだ非増殖性アデノウイルスベクターをヒト軟骨細胞様細胞株HCS-2/8細胞にin vitroで導入し、X-gal染色にて導入遺伝子が少なくとも3週間持続発現することを確認したが、今年度はまずウサギ膝関節軟骨細胞および顎関節軟骨細胞を初代培養し同様の実験を行った。即ち、両細胞にコンフルエントに達した二日後に上記のβ-ガラクトシダーゼ遺伝子を組み込んだりコンビナントウィルスをmoi20から50で感染させ遺伝子導入すると、導入遺伝子が少なくとも3週間持続発現することをX-gal染色にて確認した。2) ウサギ膝関節軟骨細胞を用いて、インターロイキン-1が一酸化窒素を介してマトリックスメタロブロテイナーゼおよび線維芽細胞増殖因子を誘導することが関節炎発症の一機序であること見出した。すなわち、これらが遺伝子治療の一標的となる可能性を示唆する知見を得た。3) 昨年度は、β-ガラクトシダーゼ遺伝子を組み込んだ非増殖性アデノウイルスベクターをモルモットの膝関節腔内に注射し、X-gal染色にて滑膜のほとんど全域と一部の変性軟骨表層に遺伝子が導入されていることを明らかにしたが、本年度は同様の方法で、P-ガラクトシダーゼ遺伝子を組み込んだりコンビナントウィルス4.8x10^7pfuをモルモットの顎関節腔内に26ゲージ針で注射し、導入遺伝子の発現をX-gal染色で調べた。その結果、顎関節では膝関節とは異なり、側頭結節の関節表層と関節円盤の線維軟骨細胞と滑膜に遺伝子が導入され、少なくとも4週間に亘ってβ-ガラクトシダーゼ遺伝子が発現し続けることがわかった。なお、肝臓や腎等の他の臓器への導入遺伝子の拡散がないことをRT-PCRで確認した。したがって、本法を用いることにより、顎関節症の遺伝子治療が理論的に可能なことが証明された。

1）将β-半乳糖苷酶基因作为上午的标记基因掺入的非增殖性腺病毒载体被引入体外软骨细胞样细胞系HCS-2/8细胞中，并且X-GAL染色证实，X-GAL染色证实了该基因连续表达至少3周。今年，首先培养了兔膝和颞下颌关节软骨细胞，并进行了类似的实验。也就是说，通过X-gal染色证实，在两个细胞汇合后两天，将上述β-半乳糖苷酶基因掺入了上述β-半乳糖苷酶基因，或将组合病毒用MOI20感染到50，然后转染，然后转染，然后连续表达3周。 2）使用兔膝关节软骨细胞，我们发现白细胞介素-1通过一氧化氮诱导基质金属蛋白酶和成纤维细胞生长因子是关节炎发育的一种机制。换句话说，我们获得了发现，表明这些可能是基因治疗的靶标。 3）去年，将掺入β-半乳糖苷酶基因的非增殖性腺病毒载体注射到豚鼠的膝关节腔中，X-GAL染色显示基因几乎完全是在synovium中和一些变性软骨表面引入的。然而，今年，使用26口径的针结合了P-半乳糖苷酶基因并将组合病毒4.8x10^7pfu注射到豚鼠的颞下颌关节腔中，并使用X-Gal染色检查了转基因的表达。结果，发现与膝关节不同，将基因引入了颞下颌管的纤维软骨细胞和滑膜中，颞下颌管的关节表面层，纤维软骨细胞和纤维软件盘的椎间盘和椎间盘的阴茎层，以及β-galactosidase kene的基因，至少要继续四周，以表现出四周的时间。此外，RT-PCR证实，转基因没有传播到其他器官，例如肝脏和肾脏。因此，使用这种方法证明，在理论上可以治疗颞下颌关节疾病的基因治疗。