MMPの新機能:マトリクス合成促進因子の転写因子としての役割

MMP的新功能：作为基质合成启动子的转录因子

基本信息

批准号：
19659487
负责人：
滝川正春
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Okayama University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

(1)MMP-3と複合体を形成する転写関連因子の探索と機能解析;MMP-3とnuclear MMP-3associated protein (NuMAP)の発生、内軟骨性骨化過程における遺伝子発現変動の解析:まず、マウスの発生段階でのこれら遺伝子の発現変動をin silicoでESTデータベースを活用し解析した結果、MMP-3の制御標的であるCCN2遺伝子発現は原腸陥入以後成体に至るまでは誘導されること、またMMP-3は出生時以後に発現が誘導されることが明らかになった。これに対してNuMAPであるretinoblastoma binding protein4(RBBP4)、nuclear receptor co-repressor1(NRCR1)、Interleukin enhancer binding factor2(ILF2)は卵細胞から成体に至るまで広い発生段階で遺伝子発現がみられた。続いてマウス成長軟骨初代培養細胞増殖・分化系でRBBP4とILF2遺伝子発現が、共に、後期分化、つまり肥大化に向かうに従って上昇することをリアルタイムRT-PCRで明らかにした。以上より、NuMAPのうちRBBP4およびILF2は、発生毅階で見る限りではcofactorとは考えにくいものの、内軟骨性骨形成においてはMMP-3によるCCN2遺伝子の転写活性化を支える役割を果たすものと考えられる。(2)他のMMPsによるCCN2/CTGF遺伝子の転写制御の検討:軟骨細胞様HCS-2/8細胞におけるCCN2遺伝子プロモーター活性を、MMP-2/9特異的阻害剤の存在下で評価した結果、MMP-3特異的阻害剤でみられた用量依存的な転写活性抑制効果はみられなかった。したがってMMP-2およびMMP-9はMMP-3とは異なり、MMPとしての古典的機能と関連した形では、CCN2遺伝子の転写制御にかかわっていないことが示唆された。

（1）搜索和功能分析与MMP-3形成复合物的转录相关因子；分析基因表达在MMP-3和核MMP-3相关蛋白（NUMAP）和内侧骨化过程的开发过程中的分析：首先，我们使用Silico中的EST数据库分析了这些基因在小鼠的发育阶段的表达MMP-3的表达是在出生后诱导的。相反，在广泛的发育阶段表达了数字视网膜细胞瘤结合蛋白4（RBBP4），核受体共抑制1（NRCR1）和白介素增强子结合因子2（ILF2），范围从卵细胞到成人。接下来，我们通过实时RT-PCR揭示了RBBP4和ILF2基因在原代细胞培养的小鼠生长软骨中的表达，随着其发展为晚分化，即增强。基于上述情况，尽管NUMAP的RBBP4和ILF2不太可能是特征病的角度是辅因子，但人们认为，在软骨骨形成中，它们在支持MMP-3的CCN2基因的转录激活中发挥了作用。（2）通过其他MMP对CCN2/CTGF基因的转录调节检查：在MMP-2/9特异性抑制剂的存在下，评估了软骨细胞样HCS-2/8细胞中的CCN2基因启动子活性，并且没有剂量依赖性的转录活性抑制剂在MMP-2/9特异性抑制剂的情况下进行了评估。因此，有人提出，与MMP-3不同，MMP-2和MMP-9与CCN2基因的转录调控不参与与经典函数（MMP）相关的形式。