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分裂組織におけるメチオニン生合成制御の分子機構

分生组织中蛋氨酸生物合成控制的分子机制

基本信息

批准号：
12037201
负责人：
内藤哲
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12037201/
关键词：
シロイヌナズナ突然変異株シスタチオニンγ-シンターゼ

项目摘要

CGS第1エキソンの制御が変化した変異株を分離するため,[CaMV35Sプロモーター]-[CGS第1エキソン(野生型もしくはmtol-l変異型)]-[GUS]の融合遺伝子を持つトランスジェニック・シロイヌナズナの戻し交雑を行い,エチルメタンスルホン酸による突然変異誘起処理を施してM2種子を得,GUS活性を指標とした変異株のスクリーニングを行った.また,より効率的なスクリーニングを可能とするため,[CaMV35Sプロモーター]-[CGS第1エキソン(野生型もしくはmtol-l変異型)]-[GFP]を作製し,戻し交雑を行った.これまで,一過的発現系を用いてCGS遺伝子の第1エキソンの機能解析行ってきたが,本研究で得られたトランスジェニック株を用いることにより,より直接的な実験が可能となった.GUSレポーターの株とGFPレポーターの株についてCGS第1エキソンが野生型の場合とmtol-l変異型の場合とで4通りの掛け合わせを行い,F1植物でのレポーター活性を調べた結果,cisに働く,即ち互いに相手のレポーター活性に影響しないことが示された.また,野生型株のカルス培養を用いた実験で,メチオニン添加に応答して約500塩基短いCGS mRNAが出現することを報告しており,短いバンドのメチオニン添加後のキネティクスからCGS mRNA分解の中間体である可能性を指摘した.[CaMV35Sプロモーター]-[CGS第1エキソン(野生型)]-[GUS]の融合遺伝子を持つトランスジェニック・シロイヌナズナで,GUS遺伝子をプローブとしたノザン解析を行ったところ,メチオニン添加に応答して約500塩基短いバンドが検出された.このことは,この短いバンドがCGS第1エキソンの機能によって生じることを示しており,中間体である可能性を支持している.

CGS No. 1 control system, isolation of different strains, [CaMV35S control system] - [CGS No. 1 control system (wild-type test) ol-l変Special type)]-[GUS]のfusion remains 伝子をhold つトランスジェニック・シロイヌナズナの戻し曑を行い, エチルメタンスルホン acid による abrupt However, the treatment of heterogeneity induces the M2 seeds to be obtained, and the GUS activity indicator is the heterogeneous strain.のスクリーニングを行った.また,よりefficiencyなスクリーニングをpossibleとするため,[CaMV35S プロモーター]-[CGS No. 1 エキソン(wild-type もしくはmtol-l heterotype)]-[GFP]を成し,戻し交雑を行った.これまで, once passed the 発appears the system を Use いてCGS 伝子のthe first エキソンの Functional Analysis Line ってきたが, this study was carried out by られたトランスジェニック Co., Ltd.を Use いることにより,よりDirect な実験がpossibleとなった.GUSレポーCGS No. 1 wild type Occasion とmtol-l変different type のoccasion とで4通りのhangけ合わせを行い, F1 plant でのレポーターactive をadjusted べた results, cisに働く, that is ちmutual いに相手のレポーターactive effect しないことがshow された.また, wild-type strain のカルスCultured with いた実験で, メチオニン added に応 Answer して about 500 塩 Basic short いCGS mRNAがappearanceすることをreportしており,shortいバンドのメチオニンadded post-のキネティクスからCGS The possibility of intermediates in mRNA decomposition is pointed out. [CaMV35S Particles]-[CGS No. 1 Biotech Type)]-[GUS] fusion legacy 伝子をholding つトランスジェニック・シロイヌナズナで,GUS legacy 伝子をプローブとしたノザンanalyticsを行ったところ,メチオニンaddに応answerしてApproximately 500 yuan base short いバンドが検出された.このことは,このShort いバンドがCGS 1st エキソンのfunctional によって生じることをshow しており, intermediate であるpossibility をsupport している.